槐耳清膏誘導(dǎo)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7凋亡的研究.pdf

1、目的研究槐耳清膏在體外對人乳腺癌細(xì)胞MCF-7的生長抑制和誘導(dǎo)凋亡作用。 方法將處于對數(shù)生長期的MCF-7細(xì)胞以不同濃度的槐耳清膏處理48h后，應(yīng)用MTT比色法檢測OD值，計(jì)算抑制率；應(yīng)用普通光學(xué)顯微鏡和熒光顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化；應(yīng)用DNA凝膠電泳、流式細(xì)胞儀分析槐耳清膏對細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用；采用免疫印染法檢測p53、p21蛋白水平變化；應(yīng)用細(xì)胞免疫組化方法檢測細(xì)胞p53、Fas表達(dá)的變化。 結(jié)果槐耳清膏對MCF-

2、7細(xì)胞的抑制率隨濃度增大而增高，濃度10mg/ml的抑制率最大，為61.1％。普通光學(xué)顯微鏡下可見細(xì)胞核碎裂、凋亡小體形成等形態(tài)學(xué)改變；熒光顯微鏡下顯示細(xì)胞核內(nèi)有濃染致密的顆粒熒光和新月型變化；DNA凝膠電泳可見梯型條帶；流式細(xì)胞儀DNA直方圖上出現(xiàn)“凋亡峰”，流式細(xì)胞儀定量分析示3、5、10mg/ml濃度下細(xì)胞凋亡率分別為6.68％、14.79％、29.76％，與對照組0.22％比較均有顯著性差異(P＜0.05)。隨著槐耳清膏濃度的增

3、高，處于G2/M期的細(xì)胞逐漸增多，處于S期的細(xì)胞逐步下降。免疫印染法檢測顯示，隨著藥物濃度的不斷增加，p53、p21/WAF1蛋白水平表現(xiàn)出明顯的逐漸增強(qiáng)趨勢。細(xì)胞免疫組化法檢測結(jié)果顯示，對照組細(xì)胞的胞膜、胞漿中Fas/APO-1(棕黃色顆粒)、p53表達(dá)很少，細(xì)胞形態(tài)正常；而經(jīng)槐耳清膏處理48h后的細(xì)胞，胞膜、胞漿中可見大量棕黃色顆粒，細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，核變小偏于一側(cè)，染色較深，且隨著藥物濃度的增加，陽性細(xì)胞數(shù)逐漸增多。結(jié)論槐耳清膏對人