重要呼吸道病毒快速檢測方法的建立.pdf

1、呼吸道病毒是一組能夠通過呼吸道引起呼吸系統(tǒng)或及其他系統(tǒng)疾病的病毒病原。呼吸道病毒的傳播方式?jīng)Q定了容易引發(fā)大流行如流感病毒和SARS病毒感染，對這類病毒的快速檢測對于采取有效的防范和治療措施極為重要。 本研究首先建立了重要呼吸道病毒病原的多重PCR檢測方法。多重PCR是在同一反應(yīng)管中完成多個(gè)不同的基因擴(kuò)增反應(yīng)，可快速同時(shí)檢測多種病毒。呼吸道病毒種類眾多，且臨床癥狀相似，多重PCR技術(shù)適于此類病毒的檢測。本研究首先建立了可檢測三種重

2、要的呼吸道病毒，即甲型流感病毒(IA)、呼吸道合胞病毒(RSV)和SARS冠狀病毒(SARS-CoV)的多重PCR方法。敏感性分別為10<'1.7>TCID<,50>/ml、10TCID<,50>/ml和10<,1.5>TCID<,50>/ml。與此同時(shí)還建立了可檢測三種重要致呼吸系統(tǒng)疾病的2、3和7血清型腺病毒的多重PCR方法，敏感性為0.01～1TCID<,50>/ml。本研究所建立的多重PCR方法可在6小時(shí)內(nèi)完成，適用于待檢主要呼

3、吸道病毒的快速甄別。 實(shí)時(shí)定量PCR具有快速，減少污染和準(zhǔn)確定量的優(yōu)點(diǎn)，和多重PCR相結(jié)合不僅能夠快速同時(shí)檢測多種病毒，而且由于減少了酶和熒光染料或探針的使用量更降低了檢測成本。本研究針對多重PCR檢測的IA、RSV和SARS-CoV，采用SYBR GREENI熒光染料法進(jìn)行多重實(shí)時(shí)定量PCR檢測。敏感性分別為10<'0.7>TCID<,50>/ml、1TCID<,50>/ml和10<'-0.5>TCID<,50>/ml，敏感性

4、總體上高于普通多重PCR，而與普通多重PCR具有同樣良好的特異性。 SARS-CoY的實(shí)驗(yàn)室檢測需在BSL-3級生物安全實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。本研究建立了基于重組、克隆表達(dá)特異抗原的SARS-CoV間接免疫熒光(IFA)檢測方法。通過獲得可穩(wěn)定表達(dá)SARS-CoV N蛋白的重組細(xì)胞系，采用IFA方法對SARS-CoV感染的血清標(biāo)本進(jìn)行檢測，從而避免可能由該病毒引起的實(shí)驗(yàn)室感染或由于缺乏BSL-3級生物安全實(shí)驗(yàn)室而造成的檢測條件限制。同時(shí)