T細胞免疫球蛋白粘蛋白3(Tim-3)在HBV相關(guān)肝細胞患者恒定自然殺傷T(iNKT)細胞上的表達及意義.pdf

1、目的:T細胞免疫球蛋白粘蛋白3（T cell immunoglobulin mucin-3，Tim-3）是Tim家族的一員，作為免疫負調(diào)控分子對免疫耐受起關(guān)鍵作用，與配體半乳凝素-9(galectin-9)作用可誘導Tim-3+T細胞死亡。腫瘤免疫逃逸是肝細胞癌發(fā)病機理中重要的一環(huán)，CD1d限制性恒定自然殺傷T細胞(iNKT)與免疫效應細胞相互作用參與腫瘤免疫。已有實驗證明Tim-3在慢性感染及腫瘤個體耗竭的CD8+T細胞上表達上調(diào)，而

2、最近有研究發(fā)現(xiàn)Tim-3/galectin-9信號通路介導乙型肝炎病毒(HBV)相關(guān)肝細胞癌(HCC)患者T細胞的功能失調(diào)及調(diào)控小鼠非酒精性脂肪肝肝臟iNKT細胞的穩(wěn)態(tài)。本研究中我們檢測了Tim-3在HBV相關(guān)HCC患者外周血和肝組織中iNKT細胞上的表達，以揭示其在HCC的發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　方法:收集15例手術(shù)切除的HBV相關(guān)HCC患者癌灶、癌旁組織作為病例組，及7例手術(shù)切除的肝血管瘤患者瘤旁正常肝臟組織作為對照組，采用機

3、械研磨法獲取肝細胞懸液，經(jīng)Percoll密度梯度分離肝臟浸潤淋巴細胞;同時采集兩組患者外周血分析單個核細胞群。標本標記熒光素偶聯(lián)的CD3、CD4、CD8、Vα24 Jα18 TCR（6B11單克隆系）及Tim-3抗體，在溶血素處理后，經(jīng)BD FACSAriaⅡ流式細胞儀檢測，分析Tim-3在HBV相關(guān)HCC癌灶、癌旁組織和正常肝組織及外周血中CD3+iNKT細胞及各亞群CD4+iNKT、CD8+iNKT和(CD4-CD8-) DN iN

4、KT細胞上的表達。
　　結(jié)果:
　　1 Tim-3在HBV相關(guān)HCC癌灶組織中的CD3+、CD4+及CD8+T細胞上表達增高。與癌旁組織及正常肝臟組織比較，Tim-3在癌灶組織中的CD3+、CD4+及CD8+T細胞上表達顯著增高（Tim-3+CD3+T細胞:2.729±1.436％ vs.0.729±0.373％和0.600±0.265; Tim-3+CD4+T細胞:3.343±1.976 vs.1.500±0.896％和1

5、.086±0.367％; Tim-3+CD8+T細胞:3.300±1.854 vs.1.300±0.635％和0.657±0.244％,P＜0.05）。
　　2 iNKT及各亞群細胞頻數(shù)在HBV相關(guān)HCC患者癌灶、癌旁組織和肝血管瘤患者正常肝臟組織及在這兩組外周血中的變化。癌灶組織中CD3+iNKT細胞頻數(shù)較癌旁組織和正常肝臟組織中的細胞頻數(shù)顯著降低（0.123±0.089％ vs.0.227±0.140％和0.462±0.145

6、％，P＜0.05）。癌灶組織中亞群CD8+iNKT和(CD4-CD8-) DN iNKT細胞頻數(shù)顯著低于癌旁組織中兩者的細胞頻數(shù)（14.8±9.4％ vs.25.2±10.8％;24.4±14.0％ vs.41.3±12.6％，P＜0.05），而癌灶組織中亞群CD4+iNKT細胞頻數(shù)則顯著高于癌旁組織中的細胞頻數(shù)（37.3±12.9％ vs.24.3±7.2％，P＜0.05）。相較肝血管瘤患者外周血，HBV相關(guān)HCC患者外周血中CD3+

7、iNKT細胞頻數(shù)顯著降低（0.152±0.362％ vs.0.373±0.200％，P＜0.05）。HBV相關(guān)HCC與肝血管瘤患者外周血中iNKT亞群細胞分布則無顯著差異。
　　3 Tim-3在HBV相關(guān)HCC癌灶、癌旁組織和肝血管瘤患者正常肝臟組織中iNKT及各亞群細胞上的表達水平。與正常肝臟組織和癌旁組織比較，Tim-3在癌灶組織中的CD3+iNKT細胞上表達顯著增高（51.2±8.3％ vs.18.4±3.4％和24.1±4

8、.5％，P＜0.05）;且Tim-3的表達主要在癌灶組織中的CD4+iNKT亞群細胞上顯著增高（62.0±6.9％ vs.35.4±4.2％和36.8±6.5％，P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　1與正常肝臟組織及HBV相關(guān)HCC癌旁組織比較，Tim-3在HBV相關(guān)HCC癌灶組織中的CD3+T細胞及CD4+和CD8+T亞群細胞上富集。
　　2 HBV相關(guān)HCC患者外周血、癌灶及癌旁組織中CD3+iNKT細胞頻數(shù)較對照組