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1、目的:應(yīng)用不同的實(shí)驗(yàn)方法來(lái)檢測(cè)免疫球蛋白重鏈結(jié)合蛋白(Bip)在人骨肉瘤細(xì)胞株Saos2細(xì)胞中的表達(dá),并進(jìn)一步研究其在臨床20例骨肉瘤標(biāo)本及其周?chē)=M織中的表達(dá);并比較骨肉瘤組織及正常組織表達(dá)的差異;術(shù)前化療與術(shù)前未化療標(biāo)本表達(dá)的差異;遠(yuǎn)隔轉(zhuǎn)移及未轉(zhuǎn)移標(biāo)本之間的表達(dá)差異。并依此來(lái)推斷這Bip在骨肉瘤組織中的表達(dá)與骨肉瘤生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移的關(guān)系以及化療對(duì)其表達(dá)的影響,以期能為骨肉瘤治療和預(yù)后評(píng)估提供實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。
方法:1、取人骨肉
2、瘤細(xì)胞株Saos2細(xì)胞進(jìn)行免疫熒光染色。以空白組作為對(duì)照。用熒光顯微鏡觀察是否有Bip蛋白質(zhì)表達(dá)。
2、取人骨肉瘤細(xì)胞株Saos2細(xì)胞抽提細(xì)胞總RNA,然后用RT-PCR試劑盒進(jìn)行PCR反應(yīng)。檢測(cè)是否有BipmRNA的表達(dá)。
3、取臨床骨肉瘤及其周?chē)=M織標(biāo)本各20例,骨肉瘤標(biāo)本中未轉(zhuǎn)移者6例,轉(zhuǎn)移者14例;術(shù)前化療者12例,術(shù)前未化療者8例。做石蠟切片進(jìn)行免疫熒光染色。檢測(cè)Bip表達(dá)強(qiáng)度。
結(jié)果:1、B
3、ip在人骨肉瘤細(xì)胞株Saos2細(xì)胞中有表達(dá),主要存在于細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上,細(xì)胞胞漿被染為綠色為陽(yáng)性。染色深時(shí)為全胞漿綠色,淺時(shí)為類泡樣胞漿綠染。
2、BipmRNA在人骨肉瘤細(xì)胞株Saos2細(xì)胞中有表達(dá)。
3、所有標(biāo)本中都有Bip的表達(dá)。Bip的表達(dá)強(qiáng)度為腫瘤組織>正常組織,腫瘤轉(zhuǎn)移組>未轉(zhuǎn)移組,術(shù)前未化療組>術(shù)前化療組。腫瘤轉(zhuǎn)移組和未轉(zhuǎn)移組,術(shù)前未化療組和術(shù)前化療組表達(dá)量有顯著差異。
結(jié)論:本研究表明,Bip
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