WNT6在骨肉瘤組織中的表達(dá)及臨床意義及其對骨肉瘤細(xì)胞增殖侵襲的影響.pdf

1、骨肉瘤是最常見的惡性骨腫瘤之一,好發(fā)于青少年,具有早期轉(zhuǎn)移和侵襲能力強的特點,致殘致死率相當(dāng)高;其昂貴的治療費用、痛苦的化療給患者及家人帶來很大影響。對骨肉瘤的早期診斷和治療到目前為止還缺乏有效的措施,骨肉瘤的發(fā)病原因和發(fā)病機(jī)制仍是未知的難題。因此,研究骨肉瘤的發(fā)病原因和機(jī)制,探尋診斷和治療骨肉瘤的有效途徑,已成為現(xiàn)階段骨肉瘤研究領(lǐng)域的主要方向之一。
　　骨肉瘤的發(fā)生發(fā)展是一個多因素、多基因作用的復(fù)雜調(diào)節(jié)過程。近年來,有關(guān)細(xì)胞信號

2、轉(zhuǎn)導(dǎo)與骨肉瘤發(fā)生的關(guān)系成為腫瘤研究的熱點,WNT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的異常改變在許多腫瘤中顯示出重要意義。WNT信號通路是一個復(fù)雜的蛋白質(zhì)作用網(wǎng)絡(luò),參與成年動物的正常生理過程,同時也參與調(diào)節(jié)動物的胚胎發(fā)育、組織穩(wěn)態(tài)及癌變等多個方面。WNT6基因是WNT家族中的重要成員,本課題組前期實驗發(fā)現(xiàn)WNT6在高轉(zhuǎn)移潛能骨肉瘤細(xì)胞系F5M2中和低轉(zhuǎn)移潛能骨肉瘤細(xì)胞系F4中差異表達(dá)明顯,這提示W(wǎng)NT6可能參與調(diào)控骨肉瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為。

3、　　目的:
　　本研究通過觀察WNT6在骨肉瘤組織中的表達(dá),探討其臨床意義;通過siRNA抑制WNT6基因的表達(dá),探討其對骨肉瘤細(xì)胞增殖及侵襲能力的影響。為以WNT6為指標(biāo)對原發(fā)性骨肉瘤的診斷和以WNT6為靶點進(jìn)行原發(fā)性骨肉瘤生物學(xué)治療提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　1、收集骨肉瘤、骨樣骨瘤和骨軟骨瘤臨床樣本,應(yīng)用SP免疫組織化學(xué)染色法分別檢測各組織中WNT6蛋白的表達(dá)情況,并分析其與骨肉瘤臨床病理參數(shù)及預(yù)后的關(guān)系。2

4、、以RNAi技術(shù)抑制MG63細(xì)胞和F5M2細(xì)胞中WNT6基因的表達(dá),應(yīng)用FAM-siRNA和Western-blot檢測轉(zhuǎn)染效率和轉(zhuǎn)染W(wǎng)NT6-siRNA后骨肉瘤細(xì)胞中WNT6蛋白的表達(dá)情況。3、應(yīng)用MTT法和Transwell法檢測抑制WNT6表達(dá)對骨肉瘤細(xì)胞增殖和侵襲能力影響。
　　結(jié)果:
　　1、WNT6在原發(fā)性骨肉瘤組織中陽性表達(dá),明顯高于骨樣骨瘤和骨軟骨瘤組織;WNT6的表達(dá)與年齡、腫瘤最大徑、肺轉(zhuǎn)移等密切相關(guān),與

5、3年生存率負(fù)相關(guān);復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組WNT6陽性表達(dá)明顯高于未復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組。2、成功轉(zhuǎn)染W(wǎng)NT6-siRNA后,兩株骨肉瘤細(xì)胞的WNT6蛋白表達(dá)水平均明顯降低。3、MTT實驗結(jié)果顯示:抑制WNT6基因表達(dá)后兩株骨肉瘤細(xì)胞的增殖均明顯減弱;Transwell實驗結(jié)果顯示,抑制WNT6基因表達(dá)后兩株骨肉瘤細(xì)胞的侵襲能力均明顯減弱。
　　結(jié)論:
　　WNT6在原發(fā)性骨肉瘤中的表達(dá)明顯上調(diào),WNT6表達(dá)與骨肉瘤的肺轉(zhuǎn)移、生存率等相關(guān),siRN