P糖蛋白與PCNA、CD34在骨肉瘤中的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、目的:骨肉瘤是一種青少年患者最常見的骨的原發(fā)性惡性腫瘤，手術(shù)切除腫瘤是骨肉瘤綜合治療中最重要的一部分，而化療一直是最重要的輔助治療手段，化療不但能殺滅殘留或擴(kuò)散的腫瘤細(xì)胞，也對(duì)控制腫瘤復(fù)發(fā)有效。近期研究表明骨肉瘤患者治療過程中均有不同程度的耐藥。通過臨床觀察及查閱文獻(xiàn)，發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致患者死亡的原因主要是肺轉(zhuǎn)移，其中耐藥的產(chǎn)生是骨肉瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的重要原因之一。因此，由MDR-1/P糖蛋白介導(dǎo)的多藥耐藥機(jī)制對(duì)治療效果的影響引起了廣泛關(guān)注。目前，以M

2、DR-1/P-gp為基礎(chǔ)逆轉(zhuǎn)惡性腫瘤耐藥是目前一個(gè)研究熱點(diǎn)。P糖蛋白(P-gp)是由多重耐藥基因(MDR-1)編碼的膜糖蛋白，它可以消耗ATP將進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的藥物泵出細(xì)胞外，消除藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生抗藥性。但P-gp不是腫瘤細(xì)胞特有的表達(dá)蛋白，它在正常組織中也有不同程度的表達(dá)，主要見于一些具有分泌、排泄功能的組織或器官。P-gp在病理上，可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞內(nèi)的藥物泵出細(xì)胞外，從而介導(dǎo)腫瘤MDR的產(chǎn)生，在生理上，減少組織

3、細(xì)胞對(duì)外源性毒物吸收，從而保護(hù)機(jī)體，這也可能是某些腫瘤最初對(duì)化療不敏感的原因。P-gp介導(dǎo)的MDR的逆轉(zhuǎn)劑是目前研究較早、研究最為廣泛及最經(jīng)為典的一種逆轉(zhuǎn)MDR的策略，一直是骨肉瘤治的研究方向之一。此外，P-gp介導(dǎo)的骨肉瘤耐藥還與MDR-1基因的表達(dá)、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路、免疫等多方面相關(guān)。因此，關(guān)于P糖蛋白在惡性腫瘤的表達(dá)研究中已趨于白熱化階段。增殖細(xì)胞核抗原（Proliferating Cell Nuclear Antigen，PCN

4、A）主要反映細(xì)胞核內(nèi)DNA增殖情況，在DNA合成期前期和合成期大量出現(xiàn)，PCNA的大量表達(dá)提示腫瘤生長旺盛，一方面反映惡性程度高，一方面反映化療效果不明顯，腫瘤有死灰復(fù)燃的可能，因此可以作為判定化療療效的一個(gè)指標(biāo)。PCNA反義寡核苷酸是在基因水平通過抑制細(xì)胞核內(nèi)遺傳物質(zhì)增殖的一種最新研制的藥物，它將PCNA作為反義核酸治療的靶分子，抑制PCNA基因表達(dá)，使細(xì)胞停止增殖或處于靜止期。通過反義技術(shù)抑制PCNA基因的表達(dá)，顯著抑制腫瘤細(xì)胞增殖

5、，而對(duì)正常細(xì)胞影響很小。CD34是一種粘附分子，主要在內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)，在細(xì)胞間粘附過程中發(fā)揮重要作用，是腫瘤微血管（Microvessel density，MVD）常用的標(biāo)記蛋白，通過計(jì)算MVD，可以評(píng)估腫瘤血管形成情況，同時(shí)它也對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖、分化、遷移具有重要意義。腫瘤的生長，轉(zhuǎn)移需要血液供應(yīng)營養(yǎng)物質(zhì)。血管是腫瘤形成一個(gè)重要原因，腫瘤血管抑制劑比較容易達(dá)到靶細(xì)胞，發(fā)揮其抗血管形成等作用，并且不易產(chǎn)生耐藥，毒性作用小，與化療藥物聯(lián)用，可

6、以提高傳統(tǒng)化療的效果，通過血管抑制劑，抑制血管生成或促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，使轉(zhuǎn)移灶處于靜止?fàn)顟B(tài)，抑制腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。由于抗腫瘤血管形成基因治療不受腫瘤細(xì)胞周期的影響，故而是其他治療方案的良好補(bǔ)充。目前大量實(shí)驗(yàn)證實(shí)，P糖蛋白、PCNA、CD34在人骨肉瘤中高表達(dá)，且作為腫瘤細(xì)胞靶蛋白在各自腫瘤治療過程中已獲取的客觀療效，但腫瘤多藥耐藥的產(chǎn)生是否與腫瘤增殖相關(guān)？是否與血管形成有關(guān)，國內(nèi)報(bào)道尚少且存在爭(zhēng)議。本研究通過選取51例人骨肉瘤標(biāo)本，按E

7、nneking分期系統(tǒng)分為Ⅰ期11例，Ⅱ期20例，Ⅲ期20例。以20例骨軟骨瘤作為對(duì)照。通過免疫組織化學(xué)染色，以P-gp、PCNA、CD34標(biāo)記的MVD分別代表腫瘤的耐藥、腫瘤的增殖及腫瘤血管形成三方面，探討P-gp蛋白在骨肉瘤中的表達(dá)及其與PCNA、CD34的相互關(guān)系及臨床指導(dǎo)意義。
　　方法:病歷資料和腫瘤標(biāo)本均來自河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院2007年1月至2012年1月手術(shù)切除的骨肉瘤標(biāo)總共51例，其中有肺轉(zhuǎn)移者15例，無肺轉(zhuǎn)移者

8、36例。發(fā)生在股骨者20例，脛骨18例，其他部位13例。采用免疫組化染色方法Envision兩步法測(cè)骨肉瘤中PCNA與CD34及P糖蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:PCNA蛋白陽性表達(dá)率:骨軟骨瘤組為10％(2/20);骨肉瘤組為58.9％(30/51)，差異有顯著性。CD34蛋白標(biāo)記的MVD值:骨肉瘤中MVD值為53.47±6.39;骨軟骨瘤中MVD值為18.20±4.55，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。P糖蛋白陽性表達(dá)率:骨肉瘤為45.1％(23

9、/51)，骨軟骨瘤為5％(1/20)。與對(duì)照組相比，P糖蛋白、PCNA、CD34在骨肉瘤組織中的表達(dá)明顯增加，以上差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。P糖蛋白的表達(dá)在骨肉瘤的Enneking、復(fù)發(fā)分期和轉(zhuǎn)移的患者中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與性別、年齡、發(fā)病部位和腫瘤直徑差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;PCNA與骨肉瘤的Enneking分期、肺轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)和腫瘤直徑差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與性別、年齡、發(fā)病部位差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;CD34標(biāo)記的MVD與Enneking

10、分級(jí)及腫瘤直徑相關(guān)，而與性別、年齡、發(fā)病部位、肺轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)無關(guān)。Spearman等級(jí)相關(guān)分析顯示P糖蛋白表達(dá)強(qiáng)度與PCNA蛋白表達(dá)強(qiáng)度呈顯著正相關(guān)，R=0.581，P＜0.05，P糖蛋白與CD34標(biāo)記的MVD之間相關(guān)無顯著性。
　　結(jié)論:P糖蛋白雖然不是骨肉瘤腫瘤特異性表達(dá)的蛋白，但惡性腫瘤其表達(dá)明顯上調(diào)，但仍可作為一個(gè)判斷腫瘤性質(zhì)的指標(biāo)，而且可以評(píng)估為患者的預(yù)后，為臨床醫(yī)師制合理治療方案提供一個(gè)依據(jù)。PCNA可以獨(dú)立作為判斷骨肉

11、瘤患者預(yù)后的指標(biāo)，與P糖蛋白聯(lián)合應(yīng)用可能會(huì)做出更準(zhǔn)確的評(píng)估，為臨床指導(dǎo)用藥提供依據(jù)。幾乎所有骨肉瘤組織CD34均有陽性表達(dá)，意味著惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展與血管形成密切相關(guān)。但其與P-gp表達(dá)無相關(guān)性。MVD可以作為評(píng)估患者預(yù)后的獨(dú)立因素，為臨床指導(dǎo)用藥，腫瘤的耐藥可能與血管的形成無關(guān)，或者需擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步研究。骨肉瘤治療過程中產(chǎn)生耐藥，到目前為止是一個(gè)沒有得到解決的臨床難題，對(duì)耐藥機(jī)制的深刻理解深入研究非常重要，只有經(jīng)多方面的綜合治療，才