α-半乳糖阻斷T細(xì)胞免疫球蛋白黏蛋白-3信號(hào)改善膿毒癥小鼠生存率.pdf

1、背景：膿毒癥是一種發(fā)病率很高的致死性臨床疾病，它的病理特點(diǎn)是強(qiáng)烈的初始炎癥反應(yīng)和隨后的持續(xù)免疫抑制狀態(tài)，這種免疫反應(yīng)失調(diào)會(huì)導(dǎo)致多器官功能衰竭、二次感染等并發(fā)癥。自然殺傷T細(xì)胞（NKT）在針對(duì)各種病原體的免疫應(yīng)答中能迅速大量分泌促炎和抗炎細(xì)胞因子并激活其他免疫細(xì)胞，促進(jìn)或抑制膿毒癥的免疫反應(yīng)，在橋接天然免疫和獲得性免疫中起重要作用。很多實(shí)驗(yàn)顯示膿毒癥的死亡率與NKT細(xì)胞的激活和細(xì)胞因子的大量分泌有關(guān)，但NKT細(xì)胞參與感染性免疫反應(yīng)的確切機(jī)

2、制，和他們的活動(dòng)是如何調(diào)節(jié)仍不清楚。T細(xì)胞免疫球蛋白和黏蛋白-3（Tim-3）與配體半乳糖凝集素-9（Galectin-9）相互作用根據(jù)細(xì)胞類型的不同在免疫調(diào)節(jié)中起著復(fù)雜的作用。我們先前報(bào)道 Tim-3/半乳糖凝集素-9信號(hào)系統(tǒng)在肝臟 NKT細(xì)胞上起著重要的調(diào)節(jié)作用，Tim-3表達(dá)上調(diào)導(dǎo)致NKT細(xì)胞激活，Tim-3陽(yáng)性 NKT細(xì)胞具有更強(qiáng)的增殖能力、產(chǎn)生更多的細(xì)胞因子刺激且更容易發(fā)生凋亡。最近的研究也表明Tim-3失調(diào)在膿毒癥中起到重要

3、作用，因此，研究Tim-3如何通過(guò)調(diào)節(jié)NKT細(xì)胞功能參與膿毒癥免疫紊亂對(duì)治療膿毒癥有重要意義。
　　材料方法：本研究動(dòng)物實(shí)驗(yàn)采用小鼠盲腸結(jié)扎穿孔（cecal ligation and puncture，CLP）和內(nèi)毒素注射兩種方式構(gòu)造膿毒癥模型，并使用Tim-3/半乳糖凝集素-9的競(jìng)爭(zhēng)性拮抗劑α-半乳糖對(duì)小鼠CLP模型進(jìn)行處理。觀察模型生存率、肝臟NKT細(xì)胞Tim-3表達(dá)、凋亡檢測(cè)、細(xì)胞因子分泌等，并在體外對(duì)NKT細(xì)胞和野生型小鼠

4、或IL-12基因敲除小鼠分離的樹突狀細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，通過(guò)上清蛋白含量測(cè)定、NKT表面 Tim-3表達(dá)等檢測(cè)樹突狀細(xì)胞分泌的 IL-12對(duì) NKT細(xì)胞表達(dá)Tim-3的調(diào)控作用。
　　結(jié)果：本次研究中我們發(fā)現(xiàn)膿毒癥小鼠模型肝臟NKT細(xì)胞Tim-3表達(dá)相較于對(duì)照組而言升高，伴隨著 NKT細(xì)胞分泌 INF-γ比例和凋亡比例均增多。并且Tim-3陽(yáng)性亞群NKT細(xì)胞比陰性群分泌INF-γ比例增高、凋亡比例增多，這意味著Tim-3的表達(dá)增加與NK

5、T細(xì)胞活化分泌INF-γ和NKT細(xì)胞凋亡正相關(guān)。通過(guò)內(nèi)毒素注射小鼠模型和NKT細(xì)胞樹突狀細(xì)胞共培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)在膿毒癥中肝臟NKT細(xì)胞表達(dá)增高是由樹突狀細(xì)胞暴露于細(xì)菌內(nèi)毒素環(huán)境分泌的IL-12所誘導(dǎo)，使用IL-12基因敲除小鼠構(gòu)建膿毒癥模型或抗IL-12抗體共培養(yǎng)可阻斷這一誘導(dǎo)效應(yīng)。使用α-半乳糖阻斷Tim-3信號(hào)通路對(duì)膿毒癥小鼠進(jìn)行治療，能阻斷半乳糖凝集
　　素-9誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞分泌 IL-12，通過(guò)減少樹突狀細(xì)胞分泌的 IL-12降低