T細(xì)胞免疫球蛋白域黏蛋白域蛋白-3(Tim-3)啟動(dòng)子區(qū)基因多態(tài)性與塵螨變應(yīng)性鼻炎關(guān)系的研究.pdf

1、目的與意義:變應(yīng)性鼻炎（以下簡(jiǎn)稱AR）的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，其發(fā)生與許多細(xì)胞因子有關(guān)，以血清中IgE、白介素4（IL-4）、IL-5水平顯著升高為特點(diǎn)。發(fā)作時(shí)細(xì)胞因子的產(chǎn)生及炎性介質(zhì)（mediator）的參與均與機(jī)體異常的免疫調(diào)節(jié)有關(guān)，即存在T輔助細(xì)胞亞群功能失調(diào)，通過(guò)釋放細(xì)胞因子，促進(jìn)IgE的合成與分泌，并增加炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)和活化。細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)失調(diào)可能是變應(yīng)性疾病發(fā)生的分子生物學(xué)基礎(chǔ)之一。T細(xì)胞免疫球蛋白域黏蛋白域蛋白（Tim）基因家族是2

2、001年發(fā)現(xiàn)的新基因家族，Tim蛋白是Tim基因編碼的一類具有共同基序的跨膜糖蛋白，Tim-1、Tim-2和Tim-3蛋白均表達(dá)在T細(xì)胞表面，其中Tim-1表達(dá)于Th2細(xì)胞，Th1細(xì)胞不表達(dá)，而Tim-3則高表達(dá)于Th1細(xì)胞而不表達(dá)于Th2細(xì)胞。國(guó)外有研究發(fā)現(xiàn)Tim-3基因多態(tài)性與變應(yīng)性疾病的易感性有關(guān)[2-4]。為了解Tim-3基因多態(tài)性與塵螨變應(yīng)性鼻炎的關(guān)系，本文利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）及擴(kuò)增阻礙突變系統(tǒng)（ARMS）技術(shù)檢測(cè)對(duì)塵

3、螨變應(yīng)性鼻炎和對(duì)照組的Tim-3啟動(dòng)子區(qū)基因多態(tài)性。了解漢族人群中Tim-3啟動(dòng)子區(qū)基因多態(tài)性在塵螨變應(yīng)性鼻炎人群中的分布情況，研究基因型與表型之間的內(nèi)在聯(lián)系，探討塵螨變應(yīng)性鼻炎發(fā)生的分子遺傳學(xué)機(jī)制及遺傳因素對(duì)塵螨變應(yīng)性鼻炎的作用機(jī)理，為進(jìn)一步更好防治變應(yīng)性鼻炎提供遺傳學(xué)線索。 材料與方法: 1.研究對(duì)象：為廣東地區(qū)廣東籍自然人群，飲食結(jié)構(gòu)相似，各研究對(duì)象之間無(wú)血緣關(guān)系。實(shí)驗(yàn)組為臨床確診的AR患者88例，并根據(jù)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)

4、行分組、分型；對(duì)照組共102例，為性別、年齡與AR組匹配的門診體檢正常人。 2.人外周血白細(xì)胞DNA的提?。红o脈血2ml，EDTA抗凝，采用美國(guó)Gentra公司的DNA抽提試劑盒，抽提基因組DNA。 3.常規(guī)空腹血樣送廣州醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院變態(tài)反應(yīng)科在UniCAP100上測(cè)定TIgE含量。 4.參照基因庫(kù)（GenBank）設(shè)計(jì)引物，Tim-3基因-574G>T分型采用擴(kuò)增阻礙突變系統(tǒng)（ARMS）法，Tim-3基因

5、-1541C>T，-882T>C分型用PCR-RFLP法，分別擴(kuò)增Tim-3基因-1541C>T，-574G>T、-882T>C目標(biāo)基因片斷，用內(nèi)切酶酶切，非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳觀察判斷相應(yīng)的基因型。 5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析處理。 結(jié)果： 1.-1541C>T基因多態(tài)性與AR的關(guān)系 -1541C>T基因基因多態(tài)性與AR存在相關(guān)性，AR組中C/T基因型頻率低于對(duì)照組；AR組與對(duì)

6、照組之間等位基因頻率存在顯著性差異，AR組的C等位基因頻率顯著高于對(duì)照組。 2.-882T>C基因多態(tài)性與AR的關(guān)系 AR組與對(duì)照組對(duì)比，各基因型頻率均無(wú)顯著性差異。 AR組與對(duì)照組之間等位基因頻率不存在顯著性差異。 3.-574G>T基因多態(tài)性與AR的關(guān)系 運(yùn)用x2檢驗(yàn)、連續(xù)性校正等方法分析AR組與對(duì)照組的-574G>T基因多態(tài)性分布情況，結(jié)果表明-574G>T的各基因型頻率和等位基因頻率在

7、AR組和對(duì)照組之間的分布無(wú)顯著性差異。 4.Tim-3-1541C>T，-882T>C，-574G>T復(fù)合突變與AR的關(guān)系 Tim-3-1541C>T，-882T>C，-574G>T的各復(fù)合基因型在AR組和對(duì)照組之間的分布無(wú)顯著性差異。 5.TIgE與AR的關(guān)系 AR組中TIgE含量與對(duì)照組的TIgE含量有顯著性差異，AR組中TIgE含量要明顯高于對(duì)照組。 結(jié)論： 1.-1541C>T

8、基因基因多態(tài)性與AR存在相關(guān)性。AR組中C/T基因型頻率低于對(duì)照組；AR組與對(duì)照組之間等位基因頻率存在顯著性差異，AR組的C等位基因頻率顯著高于對(duì)照組，C等位基因可能是AR的易感基因。 2.-882T>C基因基因多態(tài)性與AR無(wú)明顯的相關(guān)性。AR組與對(duì)照組之間等位基因頻率不存在顯著差異。 3.-574G>T基因基因多態(tài)性與AR無(wú)明顯的相關(guān)性。AR組與對(duì)照組之間等位基因頻率不存在顯著差異。 4.-1541C>T，-8