阿托伐他汀抑制無血清缺氧條件下碘海醇誘導(dǎo)人腎小管上皮細胞凋亡的可能機制.pdf

1、目的：
　　研究Drp1介導(dǎo)的線粒體分裂與ROS介導(dǎo)的氧化應(yīng)激在無血清缺氧條件下對比劑（CM）誘導(dǎo)人腎小管上皮細胞凋亡中的作用及阿托伐他汀在此過程中的保護機制。
　　方法：
　　以人腎小管上皮細胞（HKC）為研究對象，進行無血清缺氧培養(yǎng)，分別與不同濃度（10、20、40、80、100、120、150、200 mgI/ml）碘海醇孵育2 h；同一濃度碘海醇（120 mgI/ml）分別處理細胞1、2、4、6、8、12 h及

2、碘海醇（80 mgI/ml）分別處理細胞2、4、6、8、12 h；不同濃度碘海（10、20、40、80、120 mgI/ml）處理細胞2 h。不同濃度阿托伐他?。?0-10、10-9、10-8、10-7 mol/L）預(yù)先與細胞孵育24 h，同一濃度阿托伐他?。?0-7 mol/L）預(yù)先與細胞孵育（6、12、24、36 h），阿托伐他汀10-7mol/L、與陽性對照組DPI（二聯(lián)苯碘）10-5mol/L及NAC（N-乙酰半胱氨酸）10-5

3、mol/L預(yù)先與細胞孵育24 h，三者分別再與碘海醇（120 mgI/ml）在無血清缺氧條件下共刺激2 h。采用MTT法檢測細胞增殖能力；TUNEL法觀察細胞凋亡數(shù)情況；采用化學(xué)法檢測細胞上清液中微量丙二醛（MDA）含量與熒光檢測單個細胞的ROS產(chǎn)生情況；RT-PCR法檢測gp91phox、p22phox、Bax、Bcl-2及caspase-3等基因表達情況；Western-blot法檢測凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2、Drp1、Cyt

4、c、caspase-3等表達情況。
　　結(jié)果：
　　與正常對照組比較，不同濃度碘海醇組細胞增殖能力均受到不同程度抑制，其中10～40 mg組抑制不明顯，而120、150、200 mgI/ml組，1、2、4、6、8、12 h組與HSF+CM組抑制最明顯（P﹤0.05）；而ATO、DPI與NAC預(yù)處理后細胞增殖能力增高（P﹤0.05）。TUNEL法檢測示與正常對照組比較，HSF組、HSF+CM組細胞凋亡數(shù)增加（P﹤0.05）；與

5、HSF+CM組比較，ATO、DPI與NAC凋亡數(shù)明顯減少（P﹤0.05）。檢測MDA與ROS產(chǎn)生量顯示，對比劑顯著增加細胞MDA與 ROS產(chǎn)生（P﹤0.05）；而ATO、DPI與NAC顯著降低MDA與ROS產(chǎn)生（P<0.05）。RT-PCR法檢測顯示：對比劑促使gp91phox、p22phox、Bax及caspase-3 mRNA表達上調(diào)，Bcl-2 mRNA表達下調(diào)；而ATO減少gp91phox、p22phox、Bax及caspase

6、-3 mRNA的表達，增加Bcl-2 mRNA的表達，呈濃度依賴性（P<0.05）。Western-blot法檢測示：對比劑呈濃度與時間依賴性促使Drp1表達（P<0.05）；ATO呈濃度與時間依賴性降低Drp1表達（P<0.05）。CM促使Bax、Drp1、Cytc、caspase-3表達上調(diào)（P<0.05），Bcl-2表達下調(diào)（P<0.05）；而ATO、DPI與NAC減少Bax、Drp1、Cytc、caspase-3的表達（P<0.