缺氧條件下腎腺癌細(xì)胞和腎小管上皮細(xì)胞調(diào)節(jié)血管新生的差異研究.pdf

1、目的:腎細(xì)胞癌(RCC)組織內(nèi)血管多呈過度生長(zhǎng)，而慢性腎臟病(CKD)卻與之相反，即代償性血管新生不足以及間質(zhì)微血管進(jìn)行性缺失。此種差異可能是由于腎癌細(xì)胞對(duì)于局部缺氧環(huán)境的應(yīng)答有別于腎小管上皮細(xì)胞，但是具體的分子機(jī)制仍然不清楚?；|(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)及其調(diào)節(jié)分子既能調(diào)節(jié)血管新生也能影響腫瘤細(xì)胞遷移，可能在其中發(fā)揮了作用。本次研究的目的是探討缺氧對(duì)人類腎腺癌細(xì)胞(786-0)、人類腎小管上皮細(xì)胞(HK2)和人類微血管內(nèi)皮細(xì)胞（HMEC

2、-1）中MMP2、MMP9、MMP14、TIMP2和RECK等蛋白表達(dá)的影響，并且使用共培養(yǎng)的方法進(jìn)一步研究786-0和HK2細(xì)胞對(duì)鄰近的HMEC-1細(xì)胞中RECK表達(dá)、細(xì)胞增殖以及血管成環(huán)能力的影響。
　　方法:使用氯化鉆干預(yù)的方法模擬786-0、HK2和HMEC-1細(xì)胞所在的缺氧環(huán)境。使用western blot方法檢測(cè)常氧和缺氧條件下細(xì)胞中HIF-1α、MMP2、MMP9、MMP14、TIMP2和RECK等蛋白表達(dá)情況。在氯

3、化鈷處理?xiàng)l件下，將786-0和HK2細(xì)胞分別與HMEC-1共培養(yǎng)24小時(shí)，之后單獨(dú)收集HMEC-1細(xì)胞進(jìn)行western blot、細(xì)胞增殖以及血管成環(huán)實(shí)驗(yàn)，并且分別收集兩種共培養(yǎng)體系中的上清，使用明膠酶譜法檢測(cè)其中MMP2和MMP9活性。
　　結(jié)果:使用一定濃度氯化鈷(150μmol/L)分別處理三種細(xì)胞24小時(shí)后，細(xì)胞中HIF-1α的表達(dá)均明顯升高，其中786-0細(xì)胞內(nèi)RECK蛋白表達(dá)明顯下降，而與此相反在HK2和HMEC-1

4、細(xì)胞中RECK表達(dá)則輕度增加。同時(shí)，我們還觀察到786-0和HK2細(xì)胞中MMP2表達(dá)輕度下降，而在HMEC-1細(xì)胞中MMP2蛋白表達(dá)明顯增加。常氧條件下，共培養(yǎng)體系中的786-0細(xì)胞和HK2細(xì)胞均能夠上調(diào)鄰近HMEC-1細(xì)胞中RECK表達(dá)。然而，在缺氧條件下，與786-0細(xì)胞共培養(yǎng)的HMEC-1細(xì)胞顯著下調(diào)了RECK表達(dá)，而在HMEC-1和HK2共培養(yǎng)體系中則沒有明顯變化。我們同時(shí)也觀察到786-0顯著增強(qiáng)了鄰近HMEC-1細(xì)胞的增殖和