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1、目的:探討膽綠素(Biliverdin,BV)對(duì)過(guò)氧化氫(H2O2)誘導(dǎo)的大鼠近端腎小管上皮細(xì)胞(NRK52E)凋亡的作用和機(jī)制以及對(duì)膽綠素還原酶(Biliverdinreductase,BVR)在細(xì)胞膜上分布的影響。
方法:(1)體外培養(yǎng)NRK52E細(xì)胞,隨機(jī)分為6組:對(duì)照組,BV組,LY294002(PI3K抑制劑)組,H2O2組,H2O2+BV組,H2O2+BV+LY294002組。分別用BV(30μmol/L)和LY2
2、94002(15μmol/L)預(yù)處理細(xì)胞30min,然后用H2O2(200μmol/L)誘導(dǎo)NRK52E細(xì)胞凋亡。(2)流式細(xì)胞學(xué)方法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。(3)Western印跡檢測(cè)BVR、磷酸化蛋白激酶B(P-AKT)以及細(xì)胞膜上BVR的表達(dá)。(4)免疫熒光觀察細(xì)胞膜上BVR的分布。(5)免疫沉淀方法檢測(cè)BVR酪氨酸磷酸化(P-Tyr)的變化。
結(jié)果:(1)H2O2+BV組凋亡比H2O2組明顯減少(p<0.01),H2O2+BV
3、+LY組凋亡比H2O2+BV組增多(p<0.05);(2)H2O2+BV組與H2O2組比較,P-AKT表達(dá)無(wú)明顯變化(P>0.05),但持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)(p<0.05)。與H2O2+BV組相比,H2O2+BV+LY組P-AKT表達(dá)明顯下調(diào)(p<0.01);(3)H2O2和BV不改變NRK52E細(xì)胞BVR表達(dá)總量(P>0.05),但均能激活P-AKT(p<0.01),促進(jìn)BVR在細(xì)胞膜上的分布(p<0.05),但與H2O2組和BV組比較,H2
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