人胰島素瘤細(xì)胞系的建立及在Ⅰ型糖尿病研究中的應(yīng)用.pdf

1、糖尿病是對人類健康威脅最為嚴(yán)重的疾病之一.Ⅰ型糖尿病雖然發(fā)病率僅占糖尿病人的5%-10%,但由于發(fā)病早、發(fā)展快、并發(fā)癥嚴(yán)重,因此對健康的威脅更為嚴(yán)重.一般認(rèn)為:遺傳因素和自身免疫反應(yīng)破壞胰島內(nèi)分泌細(xì)胞導(dǎo)致胰島素分泌缺乏是導(dǎo)致這類糖尿病的主要原因.然而,自身免疫破壞胰島細(xì)胞的機制至今仍未闡明.因此,建立一種人的β細(xì)胞系對于研究Ⅰ型糖尿病的發(fā)病機制以及尋找新的糖尿病治療措施都具有重要意義.目的:分離、培養(yǎng)人的胰島素瘤細(xì)胞,通過長期培養(yǎng)建立細(xì)

2、胞系,并探索它在研究Ⅰ型糖尿病中的應(yīng)用.方法:胰島素瘤組織經(jīng)膠原酶消化,分離得到胰島素瘤細(xì)胞,并通過與飼養(yǎng)細(xì)胞長期培養(yǎng)建立細(xì)胞系.通過熒光顯微鏡觀察β細(xì)胞特有的自發(fā)熒光,通過RT-PCR方法檢測胰島素基因的表達,通過放射免疫法檢測葡萄糖誘導(dǎo)的胰島素釋放;通過RT-PCR,蛋白免疫雜交、細(xì)胞免疫組化分析胰島素瘤細(xì)胞IA-2自身抗原的表達,應(yīng)用MTT方法檢測抗IA-2自身抗體對胰島素瘤細(xì)胞的殺傷.結(jié)果:分離、培養(yǎng)的胰島素瘤細(xì)胞在貼壁生長中呈

3、梭形,在懸浮生長中可自發(fā)聚集成胰島樣結(jié)構(gòu).這種胰島樣結(jié)構(gòu)在熒光顯微鏡下可見自發(fā)熒光.RT-PCR分析顯示,人胰島素瘤細(xì)胞表達胰島素mRNA,但與大鼠胰島素瘤細(xì)胞INS-1相比,胰島素mRNA表達水平及合成胰島素蛋白的量均明顯偏低.RT-PCR顯示,人胰島素瘤細(xì)胞能夠表達糖尿病自身抗原IA-2和IAR.蛋白免疫雜交證實,細(xì)胞合成IA-2蛋白.應(yīng)用MTT分析發(fā)現(xiàn),IA-2抗體與胰島素瘤細(xì)胞孵育后可誘導(dǎo)10%-15%的細(xì)胞死亡.結(jié)論:通過體外