質(zhì)粒介導(dǎo)的RNA干擾肺癌端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶研究.pdf

1、廣州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文質(zhì)粒介導(dǎo)的RNA干擾肺癌端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶研究姓名：黃東海申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：外科學(xué)（胸外科）指導(dǎo)教師：葛林虎20100501廣州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文摘要IVG418篩選、單克隆之后獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞。應(yīng)用RealTimeRTPCR技術(shù)、westernblot技術(shù)檢測(cè)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染后hTERT的mRNA、蛋白表達(dá)水平的變化情況。3.MTT法、平板集落細(xì)胞形成率檢測(cè)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)及增殖能力。4.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染肺

2、癌細(xì)胞的細(xì)胞周期變化情況。結(jié)果結(jié)果1.成功構(gòu)建針對(duì)hTERT基因的干擾載體pGenesil.1hTERT，酶切及基因測(cè)序證實(shí)插入序列符合設(shè)計(jì)要求。2.pGenesil.1hTERT轉(zhuǎn)染H1299細(xì)胞經(jīng)單克隆后獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株H1299pGenesil.1hTERT和H1299pGenesil.1。與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染空白質(zhì)粒細(xì)胞組相比，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染siRNA質(zhì)粒細(xì)胞的hTERTmRNA表達(dá)量顯著下降，抑制率為93.970.83%，P0.01。3.肺

3、癌H1299pGenesil.1hTERT細(xì)胞較H1299pGenesil.1細(xì)胞hTERT蛋白的表達(dá)受到明顯抑制。4.肺癌H1299pGenesil.1hTERT細(xì)胞較H1299pGenesil.1細(xì)胞增殖能力降低。5H1299pGenesil.1hTERT細(xì)胞與對(duì)照組H1299pGenesil.1比較，G1期細(xì)胞增多，比對(duì)照組增加了18.3%（P0.05），S、G2期細(xì)胞分別少了10.4%、7.9%（P0.05）。結(jié)論結(jié)論1.成功構(gòu)