RNA干擾（RNAi）技術(shù)抑制大腸癌細(xì)胞人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶（hTERT）基因的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：通過RNA干擾技術(shù)對(duì)大腸癌細(xì)胞人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶hTERT基因的特異性抑制作用，為RNA干擾技術(shù)對(duì)大腸癌的基因治療提供理論依據(jù)。 方法：1.大腸癌細(xì)胞株HT-29的培養(yǎng)傳代。2.化學(xué)合成靶向于hTERT基因的siRNA，用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將其導(dǎo)入大腸癌細(xì)胞內(nèi)。3.實(shí)驗(yàn)分組如下：Control組(未轉(zhuǎn)染的HT-29細(xì)胞)，Lipofectamine組(脂質(zhì)體組)，加入陰性對(duì)照N-hTERTsiRNA組(簡(jiǎn)稱陰性組)，加入干擾hTE

2、RT的sihTERT組(RNA干擾組)。4.通過TRAP，RT-PCR和Western Blot方法分別檢測(cè)大腸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞的端粒酶活性，hTERTmRNA和蛋白水平，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)增殖和凋亡情況。 結(jié)果：1.熒光顯微鏡照片fluorescence顯示大腸癌HT-29細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率為60％。 2.Control組、N-hTERT組、Lipofectamine組和sihTERT組的端粒酶活性分別為1.14±0

3、.21，1.10+0.19，1.17±0.22，0.73±0.14，sihTERT組的端粒酶活性明顯下降，與其他三組相比差異有非常顯著性(P〈0.01)。 3.hTERT mRNA在Control組、N-hTERT組、Lipofectamine組和sihTERT組中的表達(dá)分別為0.87±0.15，0.91±0.16，0.85±0.14，0.47±0.08，sihTERT組與其他三組相比，hTERT mRNA表達(dá)水平顯著下降，差異

4、有非常顯著性(P<0.01)。 4.hTERT蛋白在Control組、N-hTERT組、Lipofectamine組和sihTERT組中的表達(dá)分別為0.62±0.12，0.67±0.13，0.59±0.12，0.37±0.07，sihTERT組與其他三組相比，hTERT蛋白表達(dá)顯著下降，差異有非常顯著性(P<0.01)。 5.Control組、N-hTERT組、Lipofectamine組和sihTERT組的細(xì)胞凋亡率分