抗人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶ScFv在轉(zhuǎn)基因煙草中表達(dá)的初步研究.pdf

1、1983年世界首例轉(zhuǎn)基因植物問(wèn)世以來(lái)，轉(zhuǎn)基因工程得以飛速發(fā)展。1989年Hiatt等人在植物中表達(dá)抗體，開(kāi)創(chuàng)了利用轉(zhuǎn)基因植物表達(dá)抗體的先河。現(xiàn)在多種基因工程抗體、酶、激素、血漿蛋白和疫苗等都已在植物的葉、莖、根、果實(shí)、種子以及植物細(xì)胞和器官中得到表達(dá)。近年來(lái)，SARS，禽流感的出現(xiàn)，艾滋病的迅速蔓延，給人類(lèi)的生命和健康造成了巨大的威脅。因此，以動(dòng)物生物器作為表達(dá)載體的各種抗體的安全性引起了人們高度警惕，利用植物生物器來(lái)表達(dá)各種對(duì)醫(yī)療、診

2、斷、生物研究有著重要作用的抗體成為了科學(xué)界的熱點(diǎn)。 近年來(lái)研究人員在腫瘤研究中發(fā)現(xiàn)大約85％的人類(lèi)惡性腫瘤具有端粒酶活性，因此抑制端粒酶活性為抗腫瘤藥物的設(shè)計(jì)提供了新的目標(biāo)，端粒酶抑制劑便成為一種有效的新型抗腫瘤藥物。一些學(xué)者的實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示以端粒酶為靶位點(diǎn)的腫瘤治療策略是可行的。20世紀(jì)70年代德國(guó)學(xué)者：Kohler和英國(guó)學(xué)者M(jìn)ilstein利用細(xì)胞融合技術(shù)首次成功地制備出單克隆抗體，與之相比單鏈抗體具有分子量小，免疫原性

3、低，組織穿透力強(qiáng)、血流中半衰期短、特異性好等優(yōu)點(diǎn)，并在原核細(xì)胞系統(tǒng)表達(dá)，在腫瘤的診斷和治療方面展示了更好的應(yīng)用前景。 本研究構(gòu)建含抗人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶單鏈抗體基因ScFv-hTEERT的植物表達(dá)載體p1304-SH，通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤(pán)法轉(zhuǎn)化煙草葉片。轉(zhuǎn)基因煙草植株葉片總DNA的PCR、Southern blot檢測(cè)結(jié)果表明，ScFv-hTERT基因已整合進(jìn)了轉(zhuǎn)基因煙草植株基因組中；RT-PCR,SDS-PAGE分析證實(shí)目的基因