人Ⅱ型CD74及人源與瘧原蟲來源MIF在昆蟲細(xì)胞中的表達(dá)研究.pdf

1、人Ⅱ型CD74作為巨噬細(xì)胞遷移抑制因子（Macrophage Migration InhibitoryFactor，MIF）的受體分子，MIF與其結(jié)合后能活化多條信號(hào)通路，并引發(fā)下游多種級(jí)聯(lián)反應(yīng)，與多種人類自身疾病的發(fā)生和寄生蟲的感染相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)室前期曾嘗試?yán)迷吮磉_(dá)系統(tǒng)對(duì)人源MIF（Human MIF，hMIF）、惡性瘧原蟲來源MIF（Plasmodium falciparum MIF，PfMIF）及CD74基因進(jìn)行表達(dá)及功能研究，

2、其中CD74未成功實(shí)現(xiàn)表達(dá)純化，并且表達(dá)的 MIF蛋白需通過C8反相柱去除內(nèi)毒素，限制了深入研究上述基因在瘧疾發(fā)病機(jī)理中的功能。昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)（Baculovirus Expression Vector System，BEVS）是一類應(yīng)用廣泛的真核表達(dá)系統(tǒng)，而上述基因尚未有利用BEVS表達(dá)的研究。
　　 本文通過建立昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)，對(duì)上述基因進(jìn)行了表達(dá)研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，CD74胞外端全長(zhǎng)（73-232 aa）可實(shí)現(xiàn)

3、在昆蟲細(xì)胞中的表達(dá)，目的蛋白可被His標(biāo)簽抗體和CD74抗體識(shí)別；在細(xì)胞感染72h，病毒接種MOI為8時(shí)，目的蛋白可實(shí)現(xiàn)最大表達(dá)量。包含CD74與MIF結(jié)合核心區(qū)的109-192 aa片段在mRNA可實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄的情況下未檢測(cè)到目的蛋白表達(dá)。hMIF和PfMIF也分別在昆蟲細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)了表達(dá)，目的蛋白均可被His標(biāo)簽抗體及MIF特異抗體識(shí)別，其中PfMIF在細(xì)胞感染72h時(shí)蛋白表達(dá)量最大。此外，利用雙元供體質(zhì)粒pFastBacDual實(shí)現(xiàn)了C