2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:建立一種檢測惡性瘧原蟲和間日瘧原蟲的SYBR Green實時PCR法,并將建立的方法進(jìn)行初步臨床應(yīng)用。
  方法:1.針對惡性瘧原蟲與間日瘧原蟲18S rRNA基因設(shè)計2對(3條)外引物和2對(3條)內(nèi)引物,建立可同時擴增出惡性瘧原蟲和間日瘧原蟲特異性片段的多重巢式PCR方法,并進(jìn)行敏感性、特異性評價和臨床標(biāo)本檢測。2.利用上述巢式引物進(jìn)行SYBR Green實時PCR反應(yīng),同時進(jìn)行熔解曲線和Tm值分析。優(yōu)化實時PCR的反應(yīng)

2、體系與反應(yīng)條件,檢測該方法的敏感性、特異性和重復(fù)性并進(jìn)行臨床標(biāo)本檢測。
  結(jié)果:1.多重巢式PCR可同時擴增出惡性瘧原蟲和間日瘧原蟲的18S rRNA基因片段長度分別為162bp(惡性瘧原蟲),112bp(間日瘧原蟲),并能檢出混合感染,該實驗檢測間日瘧原蟲的靈敏度為101copies/μl。特異性實驗結(jié)果顯示每對引物只檢測對應(yīng)的蟲種,54份臨床標(biāo)本的檢測結(jié)果與鏡檢法無差別(P>0.05),敏感度為97.30%,特異度為5.88

3、%。2.SYBR Green實時PCR構(gòu)建的熒光定量標(biāo)準(zhǔn)曲線循環(huán)閾值與模板濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系,擴增效率為101.884%,檢測靈敏度為101copies/μl,從提取DNA到完成檢測只需3小時,重復(fù)性好。該方法與三日瘧原蟲及卵形瘧原蟲無交叉反應(yīng),對臨床標(biāo)本的檢測結(jié)果與多重巢式PCR檢測結(jié)果一致。
  結(jié)論:1.本研究建立的多重巢式PCR方法可同時檢測惡性瘧原蟲與間日瘧原蟲,敏感性高,特異性強,可用于基層部門對瘧疾的檢測與惡性瘧

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