所謂肺硬化血管瘤的克隆性.pdf

1、目的:利用基于女性體細(xì)胞構(gòu)成組織內(nèi)X染色體失活嵌合性和雄激素受體(androgen receptor, AR)、磷酸甘油酸激酶(polymorphism of phosphoglycerate kinase, PGK)基因位點(diǎn)的克隆性分析技術(shù)和激光顯微切割技術(shù),探討所謂肺硬化性血管瘤(pulmonary sclerosing haemangioma, PSH)組織中表面立方細(xì)胞、間質(zhì)多角形細(xì)胞以及整個(gè)病變的克隆性,以進(jìn)一步闡明該病變的性

2、質(zhì)及整個(gè)病變與兩種細(xì)胞的關(guān)系。
　　方法:選PSH女性患者所謂肺硬化性血管瘤手術(shù)切除標(biāo)本29例。所有標(biāo)本均經(jīng)4％中性福爾馬林固定,石蠟包埋后進(jìn)行切片HE染色。然后應(yīng)用激光捕獲顯微切割技術(shù)分別獲取整個(gè)病變、PSH組織中多角形細(xì)胞、表面立方細(xì)胞及周圍同樣大小的正常肺組織,提取基因組DNA。Bst XI酶切,用甲基化敏感的限制性內(nèi)切酶HpaⅡ消化,巢式聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction, PCR)擴(kuò)增磷酸甘

3、油酸酯激酶(phosphoglycerate kinase, PGK)基因。HhaⅠ酶切后,PCR擴(kuò)增X染色體連鎖的雄激素受體(androgen receptor, AR)基因。PGK基因擴(kuò)增產(chǎn)物的多態(tài)性和克隆性經(jīng)2％瓊脂糖電泳顯示。AR基因擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)8％變性聚丙烯酰胺凝膠電泳、銀染顯示其長度多態(tài)性及克隆性。
　　結(jié)果:29例所謂肺硬化性血管瘤病變,光鏡下均表現(xiàn)其典型的組織學(xué)特征,即病變主要由間質(zhì)圓形或多角形細(xì)胞和表面立方細(xì)胞所構(gòu)

4、成,形成實(shí)體區(qū)、乳頭區(qū)、硬化區(qū)和出血區(qū)結(jié)構(gòu)。高倍鏡下可見實(shí)性區(qū)細(xì)胞呈圓形或多角形,胞質(zhì)呈嗜酸性或略呈透明狀,核分裂罕見,乳頭狀結(jié)構(gòu)表面均被覆單層立方上皮。克隆性檢測結(jié)果表明AR和PGK位點(diǎn)的多態(tài)性分別為:有23例(79.3％,23/29)顯示AR基因位點(diǎn)具有多態(tài)性。7例(24.1％,7/29)顯示PGK基因位點(diǎn)具有多態(tài)性。經(jīng)HhaI、HpaⅡ酶切后,所有具有多態(tài)性的標(biāo)本兩個(gè)條帶中有一個(gè)條帶的密度明顯減弱或消失,而另一個(gè)條帶保留,證明其均