E-cad-cat復(fù)合體在所謂肺硬化性血管瘤中的表達(dá).pdf

1、所謂肺硬化性血管瘤(So-calledpulmonarysclerosinghemangioma，PSH)是由Liebow等首次報(bào)道的肺部少見腫瘤，迄今為止其性質(zhì)及組織來(lái)源仍未十分明確。盡管大多數(shù)患者在臨床上呈“良性”經(jīng)過(guò)，但也有局部浸潤(rùn)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的報(bào)道。研究結(jié)果表明該腫瘤起源于原始呼吸道上皮細(xì)胞，認(rèn)為該腫瘤中的兩種形態(tài)不同的主要細(xì)胞成分(立方細(xì)胞、多角形細(xì)胞)為同一細(xì)胞起源，并把這一現(xiàn)象解釋為它們分別處于不同的分化狀態(tài)所致。我們?cè)谝?/p>

2、往的研究中發(fā)現(xiàn)，乳頭狀區(qū)表面以及血管瘤樣區(qū)腔內(nèi)襯的立方細(xì)胞與分化成熟的肺泡Ⅱ型細(xì)胞十分相似，而間質(zhì)內(nèi)的多角形細(xì)胞具有多向分化潛能。 E-cadherin是一種鈣依賴的細(xì)胞粘附分子，主要介導(dǎo)上皮細(xì)胞的細(xì)胞間粘附，它的胞內(nèi)段與catenin形成復(fù)合體對(duì)細(xì)胞間穩(wěn)定粘附起著至關(guān)重要的作用，這種復(fù)合體的形成也是發(fā)育成熟的正常上皮細(xì)胞的特征之一。p120ctn為catenin家族成員之一，并能夠調(diào)節(jié)鈣粘蛋白的更新和代謝，在細(xì)胞的粘附、運(yùn)動(dòng)中

3、起重要作用，與細(xì)胞遷移、侵襲等有重要關(guān)系。本實(shí)驗(yàn)采用S-P免疫組化方法檢測(cè)PSH中E-cad/cat復(fù)合體的表達(dá)，并以肺炎性假瘤中增生的Ⅱ型肺泡細(xì)胞為對(duì)照，探討兩種形態(tài)不同的細(xì)胞分化狀態(tài)。 材料和方法 1.1材料來(lái)源 25例PSH及8例肺炎性假瘤均來(lái)自于1995～2004年中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院手術(shù)切除標(biāo)本。標(biāo)本經(jīng)中性福爾馬林固定，石蠟包埋。 1.2方法 將標(biāo)本制成4μm連續(xù)切片，經(jīng)脫蠟，脫苯，

4、水化后，進(jìn)行HE和鏈菌素抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶(S-P法)免疫染色后光鏡觀察。E-cadherin、β-catenin為鼠抗人單克隆即用型抗體(購(gòu)于福州邁新公司)，p120ctn鼠抗人單克隆抗體(購(gòu)于美國(guó)Transduction公司)稀釋濃度為1∶200，SP染色試劑盒、DAB顯色液為福州邁新公司產(chǎn)品。。三種抗體均用高溫高壓抗原修復(fù)，DAB顯色后用蘇木素復(fù)染。PBS緩沖液代替一抗為陰性對(duì)照。 1.3結(jié)果判定 每張切片隨

5、機(jī)選取5個(gè)高倍視野，每高倍視野分別計(jì)數(shù)100個(gè)不同形態(tài)的兩種瘤細(xì)胞，無(wú)細(xì)胞著色為(-)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤25％為(+)，26～50％為(++)，51～75％為(+++)，≥76％為(++++)。 結(jié)果 2.1大體及組織學(xué)形態(tài)腫物為境界清楚的實(shí)性病灶，無(wú)包膜，顏色灰黃，局部出血時(shí)呈暗紅色，質(zhì)地中等。光鏡下腫瘤由實(shí)性區(qū)、乳頭區(qū)、血管瘤樣區(qū)和硬化區(qū)四種結(jié)構(gòu)混合構(gòu)成，四種結(jié)構(gòu)有不同程度的移行。腫瘤細(xì)胞主要有兩種：一種是位于實(shí)性區(qū)和乳

6、頭區(qū)內(nèi)的多角形瘤細(xì)胞，另一種是位于乳頭區(qū)表面和各種腔隙內(nèi)被覆的立方細(xì)胞。位于實(shí)性區(qū)內(nèi)的少量立方細(xì)胞呈簇狀或腺樣。在大部分PSH的組織結(jié)構(gòu)中可見數(shù)量較多的嗜堿性肥大細(xì)胞。間質(zhì)內(nèi)可見淋巴細(xì)胞等炎細(xì)胞浸潤(rùn)，還可見含鐵血黃素沉積、鈣化和骨化。 2.2免疫組織化學(xué)結(jié)果 本組實(shí)驗(yàn)的25例PSH中的立方細(xì)胞(不包括血管瘤樣區(qū)的腔內(nèi)襯細(xì)胞)，E-cadherin、β-catenin和p120ctn均呈胞膜強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，其膜著色清楚、連續(xù)，

7、強(qiáng)陽(yáng)性(++++)表達(dá)率為100％，β-catenin在胞膜強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)的同時(shí)出現(xiàn)胞質(zhì)表達(dá)。血管瘤樣區(qū)的腔內(nèi)襯細(xì)胞三種分子均呈胞質(zhì)和胞膜強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。多角形細(xì)胞中三種上皮粘附分子的陽(yáng)性表達(dá)率則明顯降低，表達(dá)強(qiáng)度明顯減弱，且陽(yáng)性反應(yīng)信號(hào)以胞質(zhì)為主。E-cadherin呈不表達(dá)或弱陽(yáng)性表達(dá)，β-catenin胞膜表達(dá)缺失伴部分胞質(zhì)表達(dá)，p120ctn以胞質(zhì)表達(dá)為主伴少量胞膜表達(dá)。三種粘附分子在每例多角形細(xì)胞的陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)相差很大，在同一例不同

8、部位的多角形細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)亦有很大差異。8例肺炎性假瘤中增生的Ⅱ型肺泡細(xì)胞其E-cadherin、β-catenin和p120ctn表達(dá)與PSH中的立方細(xì)胞的表達(dá)情況相似。 討論自從1956年Liebow等首次報(bào)告并命名了肺硬化性血管瘤以來(lái)，大量的研究結(jié)果使得人們對(duì)PSH的起源和性質(zhì)等有了逐步深入的認(rèn)識(shí)。如Devouassous-Shisheborran等研究發(fā)現(xiàn)可特異性表達(dá)于肺胚芽上皮及分化的肺泡Ⅱ型上皮或Clara細(xì)胞中的TT

9、F-1，在PSH的立方細(xì)胞和多角形細(xì)胞均呈明確的胞核強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，從而證實(shí)了PSH源于原始呼吸道上皮細(xì)胞。在我們以往的研究中發(fā)現(xiàn)，盡管立方細(xì)胞TFF-1呈陽(yáng)性表達(dá)，但其SP-B和CK也呈陽(yáng)性表達(dá)，并發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)內(nèi)有特征性的板層小體存在，說(shuō)明該細(xì)胞類似于Ⅱ型肺泡細(xì)胞；而多角形細(xì)胞除TTF-1陽(yáng)性外，Vimentin也呈強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)，而CK、EMA以及NSE等神經(jīng)內(nèi)分泌標(biāo)記也有散在弱陽(yáng)性表達(dá)，但SP-B呈陰性，說(shuō)明多角形細(xì)胞與立方細(xì)胞不同，具有多向

10、分化的潛能。為了進(jìn)一步證實(shí)這一點(diǎn)，我們選用了正常上皮細(xì)胞較為恒定表達(dá)的E-cadherin/catenin復(fù)合體標(biāo)記物，并與一般肺炎性假瘤中經(jīng)常出現(xiàn)的增生性Ⅱ型肺泡細(xì)胞進(jìn)行比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)E-cadherin、β-catenin和p120ctn在PSH的立方細(xì)胞中均呈胞膜強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，β-catenin在胞膜強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)的同時(shí)出現(xiàn)胞質(zhì)表達(dá)，而這一表達(dá)情況與肺炎性假瘤中增生的Ⅱ型肺泡細(xì)胞的表達(dá)情況相似，提示PSH中的立方細(xì)胞在腫瘤形成過(guò)程中向Ⅱ

11、型肺泡細(xì)胞分化的現(xiàn)象。多角形細(xì)胞的E-cadherin、β-catenin和p120ctn的表達(dá)與表面立方細(xì)胞表達(dá)情況截然不同，不僅其陽(yáng)性表達(dá)率明顯下降，表達(dá)強(qiáng)度明顯減弱，而且出現(xiàn)胞質(zhì)內(nèi)的表達(dá)。提示多角形細(xì)胞與立方細(xì)胞不同，他們可能分別處于不同的分化狀態(tài)。另外，我們發(fā)現(xiàn)三種粘附分子在每一例的多角形細(xì)胞中的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)相差很大，而且在同一例的不同部位其陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)也有很大差異，即多角形細(xì)胞的三種粘附分子表達(dá)存在著異質(zhì)性。該結(jié)果與Nagata等

12、的結(jié)果(三種上皮標(biāo)記物EMA、SC和SurfactantApoprotein在PSH的多角形細(xì)胞中存在異質(zhì)性著色)有相似之處。之所以出現(xiàn)這樣的結(jié)果可能與起源于原始呼吸道上皮的多角形細(xì)胞可能處于不同的分化程度或向不同方向分化有關(guān)。 眾所周知，細(xì)胞間粘附力下降是腫瘤轉(zhuǎn)移的始動(dòng)環(huán)節(jié)。E-cadherin存在于上皮細(xì)胞膜上，其功能是介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞之間的粘附，維持細(xì)胞結(jié)構(gòu)和形態(tài)的穩(wěn)定。E-cadherin碳末端胞內(nèi)肽段與β-catenin

13、或γ-catenin結(jié)合，后者又通過(guò)α-catenin與肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架結(jié)合。另外E-cadherin的juxtamembrane(JMD)結(jié)構(gòu)域與p120ctn的Arm域結(jié)合，這樣就形成了cad-cat復(fù)合物。該復(fù)合物中E-cadherin或catenin的改變均可影響其粘附功能，表現(xiàn)為細(xì)胞間粘附力下降，細(xì)胞極性喪失，排列松散，易發(fā)生脫離、侵襲和轉(zhuǎn)移。盡管PSH患者中絕大多數(shù)呈“良性”經(jīng)過(guò)，但到目前為止已有10例以上PSH發(fā)生肺門、支

14、氣管周及葉間局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的報(bào)道，在其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中可見大量成片狀的多角形細(xì)胞而立方細(xì)胞極少見或無(wú)。在本組的25例PSH中，均未見淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的情況發(fā)生，無(wú)法進(jìn)行轉(zhuǎn)移灶的觀察，但從多角形細(xì)胞缺乏形成E-cad/cat復(fù)合體的能力這一點(diǎn)上，也支持多角形細(xì)胞不如立方細(xì)胞分化成熟的觀點(diǎn)。 本實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)PSH中血管瘤樣區(qū)的腔內(nèi)襯細(xì)胞E-cadherin、β-catenin和p120ctn均為胞漿、胞膜陽(yáng)性表達(dá)，而組織中的血管內(nèi)皮無(wú)任何著色