單純皰疹病毒胸苷激酶基因聯(lián)合內(nèi)皮抑素基因治療肝癌的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分 HSV-TK/GCV系統(tǒng)對SMMC-7721細(xì)胞體外殺傷效應(yīng)的研究 目的:研究自殺基因HSV-TK/GCV系統(tǒng)在體外對肝癌SMMC-7721細(xì)胞的殺傷作用和旁觀者效應(yīng).方法:應(yīng)用攜帶HSV-TK基因的質(zhì)粒pDR2-TK通過陽離子脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染人肝癌細(xì)胞SMMC-7721,并經(jīng)潮霉素篩選,獲得抗性細(xì)胞集落,并命名為SMMC/TK,RT-PCR檢測轉(zhuǎn)染細(xì)胞HSV-TK基因mRNA表達(dá),MTT法檢測給予丙氧鳥苷(GCV)后,對肝癌細(xì)

2、胞的殺傷作用和旁觀者效應(yīng),并觀察給藥后細(xì)胞形態(tài)的改變.結(jié)論:HSV-TK系統(tǒng)對SMMC-7721細(xì)胞有很好的抑制作用,轉(zhuǎn)染細(xì)胞較之未轉(zhuǎn)染細(xì)胞對GCV敏感度顯著增加,且呈劑量依賴性.第二部分 重組人內(nèi)皮抑素真核表達(dá)載體pCD-sEndo的構(gòu)建及其在SMMC-7721細(xì)胞中的表達(dá) 目的:構(gòu)建表達(dá)人內(nèi)皮抑素的重組真核表達(dá)載體,并將其轉(zhuǎn)染人肝癌SMMC-7721細(xì)胞,觀察其體外抑制血管生成的活性.結(jié)論:重組Endostatin真核表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建正

3、確,將其轉(zhuǎn)染SMMC-7721細(xì)胞后可以有效的表達(dá)具有生物學(xué)活性的人Endostatin蛋白并能分泌到細(xì)胞外,為下一步應(yīng)用于腫瘤的基因治療提供了基礎(chǔ).第三部分 HSV-TK基因與內(nèi)皮抑素基因聯(lián)合治療實(shí)驗(yàn)性肝癌 目的:尋求有效的腫瘤基因治療方法,研究陽離子脂質(zhì)體介導(dǎo)的單純皰疹病毒胸苷激酶基因(HSV-TK)與內(nèi)皮抑素基因(Endostatin)聯(lián)合治療裸鼠人肝癌的作用.結(jié)論:瘤內(nèi)注射攜帶endostatin基因的陽離子脂質(zhì)體,可減少裸鼠體