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文檔簡介
1、本實驗通過構(gòu)建表達2.2kbLAT的真核表達載體pVAX-LAT，使其在SH-SY5Y神經(jīng)細胞中瞬時表達，為后續(xù)在HSV-2低滴度情況下，模擬人體內(nèi)神經(jīng)節(jié)中LAT的大量表達，抗神經(jīng)細胞凋亡的實驗，提供了實驗基礎。 從皰疹病毒Ⅱ型基因組里，PCR擴增出長為3200 bp的LAT基因。由于HSV-2LAT基因GC含量高(達78％)，且二級結(jié)構(gòu)復雜，因此不易擴增，也不易直接連接。因此研究選用LAT基因與pVAX載體共有的BamH Ⅰ酶
2、切位點，將LAT基因分為HindⅢ-BamH Ⅰ(1200bp)和BamH Ⅰ-Pst Ⅰ(2000bp)兩段，分段克隆，并設計兩對含相應酶切位點的引物，以一次PCR擴增的LAT基因為模板，PCR擴增獲得LAT全長基因的兩分段產(chǎn)物HindⅢ-BamH I和BamH Ⅰ-Pst Ⅰ，分別連接至pVAX載體中，構(gòu)建兩個表達載體pVAX-HindⅢ-BamH Ⅰ和pVAX-BamH Ⅰ-Pst Ⅰ。重組載體采用通用引物進行序列測定分析，與Ge
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