病毒寧體外抗Ⅰ型單純皰疹病毒活性的研究.pdf

1、單純皰疹性角膜炎(herpessimplexkeratitis，HSK)是由單純皰疹Ⅰ型病毒引起的角膜病，是目前最常見的也是最嚴(yán)重的角膜病。近年來，此病的發(fā)病率有上升的趨勢，據(jù)統(tǒng)計(jì)，它在角膜病中所占的比例已經(jīng)上升至首位。由于本病具有反復(fù)發(fā)作，遷延不愈，對藥物具有耐藥性等臨床特點(diǎn)，已成為當(dāng)前眼科醫(yī)生最棘手的眼病之一。目前對本病的治療方案較多，雖然均有一定療效，但復(fù)發(fā)率較高。目前對HSK的潛伏和復(fù)發(fā)機(jī)制尚未完全清楚，在預(yù)防和治療上未取得突破

2、性進(jìn)展。探索HSK的防治方法，降低此病的致盲率，是目前國內(nèi)外眼科工作的重要研究課題。本研究是在了解國內(nèi)外防治HSK各種方法的基礎(chǔ)上，參閱大量中醫(yī)藥治療經(jīng)驗(yàn)，通過體外實(shí)驗(yàn)探討中藥制劑-病毒寧對HSK的多點(diǎn)位抗病毒作用。 目的：對病毒寧體外抗單純皰疹病毒I型的活性進(jìn)行研究，探討病毒寧體外抗病毒機(jī)制，為臨床治療HSK提供高效、抗復(fù)發(fā)藥物。 方法： 1培養(yǎng)金黃地鼠腎傳代細(xì)胞BHK-21和HSV-1病毒。 2通過病

3、毒毒力和藥物毒性測定，確定病毒半數(shù)感染劑量(TCID50)以及藥物對細(xì)胞最大無毒濃度TD0。 3將100TCID50HSV-1病毒與等量不同稀釋濃度的TD0藥液進(jìn)行混合培養(yǎng)，觀察細(xì)胞病變情況，探討病毒寧對HSV-1的直接殺滅作用，并與無環(huán)鳥苷進(jìn)行比較。 4將不同稀釋濃度的TD50藥液與生長旺盛的BHK-21進(jìn)行混合培養(yǎng)2h后，再與100TCID50HSV-1病毒混合培養(yǎng)，觀察細(xì)胞病變情況，探討病毒寧對HSV-1感染細(xì)胞的

4、阻斷作用，并與無環(huán)鳥苷進(jìn)行比較。 5將100TCID50HSV-1病毒與細(xì)胞在室溫作用2小時后，加入含有不同濃度TD0藥液的維持液混合培養(yǎng)，通過觀察細(xì)胞病變情況，探討病毒寧對HSV-1增殖的抑制作用，并與無環(huán)鳥苷進(jìn)行比較。 結(jié)果：中性紅染色法測得病毒寧和無環(huán)鳥苷對細(xì)胞最大無毒濃度分別為1.5g/L和62.5mg/L，病毒半數(shù)感染劑量(TCID50)為10-7。在不同加藥方式下，病毒寧與無環(huán)鳥苷都能表現(xiàn)出對病毒的直接殺傷作

5、用并能抑制病毒吸附后的復(fù)制增殖過程，這些作用總體上隨藥物濃度升高而增強(qiáng)，其中病毒寧組細(xì)胞病變要低于無環(huán)鳥苷組，病毒寧預(yù)防HSV-1作用強(qiáng)于無環(huán)鳥苷。 病毒經(jīng)藥物處理后攻擊細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：病毒寧組與HSV-1組比較有顯著性差異(P＜0.05)，病毒寧組與無環(huán)鳥苷組比較有顯著性差異(P＜0.05)，說明病毒寧對HSV-1的直接殺滅作用效果明顯強(qiáng)于無環(huán)鳥苷；病毒寧ID50為0.0815g/L，無環(huán)鳥苷ID50為9.23，無環(huán)鳥苷T

6、I為8，病毒寧TI為36.92是無環(huán)鳥苷的4.6倍，說明病毒寧在抗HSV-1病毒作用上屬于高效低毒藥物，對細(xì)胞的安全性也高于無環(huán)鳥苷； 病毒攻擊經(jīng)藥物處理后的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：病毒寧組與HSV-1組比較有顯著性差異(P＜0.05)，病毒寧組與無環(huán)鳥苷組比較無顯著性差異(P＞0.05)，說明病毒寧對HSV-1侵入細(xì)胞有阻斷作用，但作用與無環(huán)鳥苷無顯著性差別；病毒寧ID50為0.325g/L，無環(huán)鳥苷ID50為31.25g/L，無環(huán)

7、鳥苷TI為4，病毒寧TI為9.23是無環(huán)鳥苷的2.3倍，表明病毒寧在阻斷HSV-1侵入細(xì)胞繁殖方面屬于低毒，對細(xì)胞的安全性也高于無環(huán)鳥苷； 病毒攻擊細(xì)胞后加藥結(jié)果顯示：病毒寧組與HSV-1組比較有顯著性差異(P＜0.05)，病毒寧組與無環(huán)鳥苷組比較有顯著性差異(P＜0.05)，說明病毒寧能阻斷HSV-1的生物合成，而且阻斷效果強(qiáng)于無環(huán)鳥苷；病毒寧ID50為0.1625g/L，無環(huán)鳥苷的ID50為15.625g/L，無環(huán)鳥苷TI為