PGG抑制單純皰疹病毒1型核轉(zhuǎn)運(yùn)及出核機(jī)制的研究.pdf

1、單純皰疹病毒1型(HSV-1)是皰疹病毒家族中的一員,它主要通過感染口唇,神經(jīng)組織,以及皮膚(非生殖器)來侵入人體,正常情況下潛伏于體內(nèi)。當(dāng)機(jī)體免疫力下降,月經(jīng)期間或情緒低落時有可能引起體內(nèi)潛伏的皰疹病毒的激活。本實(shí)驗(yàn)室前期發(fā)現(xiàn)從余甘子枝葉中所提取的五沒食子酰基葡萄糖酸(Pentagalloylglucose,PGG)在抑制HSV-1方面有良好的效果。
　　實(shí)驗(yàn)?zāi)康?研究藥物PGG對單純皰疹病毒I型在宿主細(xì)胞內(nèi)核轉(zhuǎn)運(yùn)及出核過程的影

2、響,尋找對抗皰疹病毒株的新型藥物。
　　實(shí)驗(yàn)方法:采用MTT檢測藥物毒性,空斑實(shí)驗(yàn)檢測PGG對于HSV-1及幾種ACV-耐藥株的空斑抑制率及半數(shù)抑制濃度。
　　共聚焦觀察PGG能否影響HSV-1核轉(zhuǎn)運(yùn)。RT-PCR檢測加藥后即刻早期基因ICP0,ICP4和UL54表達(dá)量的變化。通過RT-PCR和western-blot檢測PGG抑制病毒核轉(zhuǎn)運(yùn)過程是否與HSP90、tubulin或Dynein有關(guān)。
　　檢測上清液中病毒

3、的TCID50,間接推斷加藥對病毒出核有無影響。構(gòu)建攜帶病毒基因UL31和UL34的融合表達(dá)載體pEFGP-NI-UL31和pEFGP-NI-UL34。轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒進(jìn)入細(xì)胞,加藥后觀察兩個基因的定位與表達(dá)量是否受到PGG的影響。進(jìn)一步通過RT-PCR和western-blot檢測其表達(dá)量。利用空斑實(shí)驗(yàn)檢測病毒感染出核時期加藥,再通過轉(zhuǎn)染使UL31或UL34過表達(dá),能否減輕PGG對病毒出核的抑制作用。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)論:(1)PGG對臨