Ⅱ型單純皰疹病毒糖蛋白D的表達(dá)、純化、結(jié)晶以及結(jié)構(gòu)解析.pdf

1、皰疹病毒是一種常見病原微生物，在自然界中能感染眾多宿主。單純皰疹病毒（Herpes simplex virus type，HSV）是皰疹病毒科α亞科，其復(fù)制周期短，繁殖速度快。根據(jù)血清型分類，HSV分為兩個(gè)種類，分別是I型單純皰疹病毒（HSV-1）和II型單純皰疹病毒（HSV-2）。HSV-1易感染人的口腔以及眼上皮細(xì)胞，導(dǎo)致口腔皰疹、單純皰疹病毒性角膜炎等疾病。HSV-2則主要感染人的生殖系統(tǒng)，引起生殖器皰疹。該性病的發(fā)病率僅次于淋病

2、和梅毒。HSV-1和HSV-2均能潛伏感染神經(jīng)細(xì)胞。不論是HSV-1還是HSV-2，單純皰疹病毒感染細(xì)胞都離不開三個(gè)過程：粘附、受體結(jié)合、融合。在這三個(gè)過程中，HSV囊膜上的糖蛋白起到了重要作用。gC和gB與受體結(jié)合后使得病毒的囊膜和細(xì)胞的脂質(zhì)膜靠近，從而病毒粘附在細(xì)胞上。gD與nectin-1/nectin-2、HVEM、3O硫酸乙酰肝素、gB與PILRα、NonmusclemyosinIIA進(jìn)行受體識(shí)別和結(jié)合。之后形成的gD、gB、

3、gH和gL的四元復(fù)合物引發(fā)膜融合。其中g(shù)D在病毒與宿主細(xì)胞的膜融合過程中作用關(guān)鍵。根據(jù)已經(jīng)解析的HSV-1gD以及其與受體HVEM的復(fù)合體的結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)，gD的C端回折纏繞在N 端的受體結(jié)合位點(diǎn)，但當(dāng)受體結(jié)合時(shí)，C端讓出該結(jié)合位點(diǎn)。而C端與gB、gH和gL形成融合符合物。由于HSV-1和HSV-2二者感染的細(xì)胞不同，并且不同株系病毒的囊膜蛋白gD選擇的受體也有所不同。為了了解HSV-1gD和HSV-2gD在受體選擇上的差異，需要進(jìn)一步研究這

4、兩種蛋白與其受體結(jié)合的細(xì)節(jié)。而目前所得到的gD蛋白結(jié)構(gòu)僅是HSV-1KOS株的gD（1259）、（1306）以及與HVEM的復(fù)合物結(jié)構(gòu)，并沒有HSV-2gD的結(jié)構(gòu)。故在本文中利用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)出HSV-2stain333的gD蛋白的胞外部分區(qū)域（1285aa），經(jīng)過NiNTA親和層析以及分子排阻層析純化后，濃縮至5mg/ml和10mg/ml，進(jìn)行懸滴氣相擴(kuò)散法篩選蛋白晶體的生長條件，并得到初篩的晶體。在初篩的晶體生長條件下進(jìn)行優(yōu)化