5-氮雜-2-脫氧胞苷對(duì)牛胎兒成纖維細(xì)胞和人肺癌細(xì)胞A549的影響及作用機(jī)理的研究.pdf

1、5-氮雜-2-脫氧胞苷(5-aza-dC)具有特異性抑制DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶活性的作用，通過降低細(xì)胞內(nèi)DNA甲基化水平影響基因的表達(dá)。利用5-aza-dC處理供體細(xì)胞能顯著提高體細(xì)胞核移植效率，臨床試驗(yàn)也表明5-aza-dC對(duì)癌癥有一定的治療作用，但其對(duì)細(xì)胞影響的作用研究還很有限。本研究采用不同濃度的5-aza-dC處理牛胎兒成纖維細(xì)胞和人肺癌細(xì)胞A549后，對(duì)比研究了5-aza-dC對(duì)細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞內(nèi)活性氧水平的影響

2、，并通過檢測(cè)處理前后凋亡相關(guān)基因、多能基因、癌基因等表達(dá)量的變化，對(duì)5-aza-dC影響細(xì)胞的作用機(jī)理進(jìn)行了研究。
　　1.5-aza-dC對(duì)牛成纖維細(xì)胞的影響
　　用0-10 mM的5-aza-dC處理牛胎兒成纖維細(xì)胞24 h、48 h后，MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性表明，較低濃度的5-aza-dC(0-10μM)處理牛胎兒成纖維細(xì)胞，細(xì)胞活性較未處理組有一定的下降，但無顯著差異(p＞0.05);高濃度的5-aza-dC(1-10

3、 mM)對(duì)牛胎兒成纖維細(xì)胞的增殖具有明顯的抑制作用，且表現(xiàn)為劑量和時(shí)間依賴性(p＜0.05）。流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞周期表明，5-aza-dC處理后細(xì)胞凋亡率呈濃度依賴性上升(p＜0.05);5-aza-dC將牛成纖維細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期，且使細(xì)胞內(nèi)的活性氧水平顯著性升高(p＜0.05); Real-time PCR檢測(cè)相關(guān)基因表達(dá)量的結(jié)果表明，用濃度為10mM的5-aza-dC處理牛成纖維細(xì)胞48 h后，與對(duì)照組相比，凋

4、亡基因相關(guān)BAD、 BAX、CYCS、CASPASE-3、CASPASE-9表達(dá)量顯著上升，抑凋亡基因BCL-2表達(dá)量顯著降低(p＜0.05)。
　　2.5-aza-dC對(duì)人肺癌細(xì)胞A549的影響
　　用0-10μM的5-aza-dC處理人肺癌細(xì)胞A54924 h、48 h后，MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性表明，5-aza-dC對(duì)A549細(xì)胞的增殖具有明顯的抑制作用，且表現(xiàn)為劑量和時(shí)間依賴性(p＜0.05）;流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率和

5、細(xì)胞周期發(fā)現(xiàn)，1-10μM的5-aza-dC處理人肺癌細(xì)胞A549，其凋亡率呈濃度依賴性上升（p＜0.05）;同時(shí)5-aza-dC將人肺癌細(xì)胞A549細(xì)胞周期阻滯于G2/M期，且使細(xì)胞內(nèi)的活性氧水平顯著性升高(p＜0.05）;用濃度為10 mM的5-aza-dC處理人肺癌細(xì)胞A54948h后，Real-time PCR檢測(cè)相關(guān)基因表達(dá)量表明，全能基因SOX2、NANOG和癌基因ELPl3和Cer-bA表達(dá)量顯著降低;凋亡相關(guān)基因CASE

6、PASE-9的表達(dá)量顯著降低;Transwell小室檢測(cè)結(jié)果表明5-aza-dC能夠降低人肺癌細(xì)胞A549的遷移能力和侵襲能力。
　　綜上所述，5-aza-dC能夠在一定范圍內(nèi)以劑量和時(shí)間依賴的方式對(duì)牛成纖維細(xì)胞和人肺癌細(xì)胞A549的增殖起抑制作用，并誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡;5-aza-dC直接對(duì)產(chǎn)生細(xì)胞毒性作用或者通過影響DNA甲基化，引起細(xì)胞周期阻滯、細(xì)胞發(fā)生凋亡從而具有抗腫瘤作用;其誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡機(jī)制可能與影響線粒體氧化應(yīng)激，以及凋