5-氮-2-脫氧胞苷和丁酸鈉對水牛供體細胞生長、周期、凋亡及克隆胚胎發(fā)育的影響.pdf

1、體細胞核移植技術(shù)對于體外胚胎的生產(chǎn)具有重要的意義，但是體細胞核移植成功率非常低，影響了該技術(shù)的實際應用。目前認為體細胞核移植效率低的主要原因是供體細胞的不完全重編程?？茖W家們已經(jīng)嘗試使用DNA甲基化酶抑制劑和組蛋白去乙酰化酶抑制劑處理核移植供體細胞或胚胎，從而提高表觀遺傳重編程的程度。本試驗用DNA甲基化酶抑制劑5-氮-2-脫氧胞苷(5-aza-dC)和組蛋白去乙?；敢种苿┒∷徕c(Sodium butyrate，NaBu)處理水牛成纖

2、維細胞，檢測細胞形態(tài)、生長、周期和凋亡等，并移植到黃牛卵母細胞中，觀察胚胎發(fā)育情況，從而篩選兩種試劑處理供體細胞的最佳處理方式，得到如下結(jié)果與結(jié)論:
　　 1.不同濃度的NaBu對水牛成纖維細胞形態(tài)、生長、細胞周期和凋亡的影響
　　 用0、0.5、1.0、2.0、2.5和3.0 mmol/L NaBu處理水牛成纖維細胞，檢測細胞形態(tài)、生長、周期和凋亡，確定處理細胞的最佳濃度。結(jié)果顯示:0.5和1.0mmol/L NaBu

3、處理的細胞形態(tài)正常，2.0、2.5和3.0mmol/L NaBu處理的細胞變大變長，并出現(xiàn)大量死亡;隨著NaBu濃度的升高，對細胞生長抑制作用增強，0.5mmol/L NaBu處理48h后的細胞抑制率與對照組無顯著差異(2.75對0，P＞0.05)，其他濃度的均有顯著性差異(P＜0.05);0.5mmol/L和1.0mmol/L NaBu處理細胞的G0/G1期和S期細胞比例與對照組無顯著性差異（P＞0.05），2.0、2.5、3.0mm

4、ol/L處理的G0/G1期和S期細胞比例有顯著性差異(P＜0.05);0.5 mmol/L和1.0mmol/LNaBu處理的早期凋亡與對照組無顯著差異(P＞0.05)，2.0、2.5、3.0mmol/L處理與對照組差異顯著(P＜0.05);0.5mmol/L NaBu處理的晚期凋亡與對照組無顯著差異(P＞0.05)，其他組均與對照組有顯著差異(P＜0.05）。從結(jié)果可知:0.5mmol/L和1.0mmol/L NaBu對細胞形態(tài)、生長、

5、周期和凋亡影響較小，適合作為處理供體細胞的濃度。
　　 2.5-aza-dC和NaBu聯(lián)合處理對水牛成纖維細胞生長、周期和凋亡的影響
　　 根據(jù)本課題組前期的試驗結(jié)果，選擇0.01μmol/L5-aza-dC處理水牛成纖維細胞72h，1.0mmol/L NaBu處理48h和兩種試劑聯(lián)合處理，檢測細胞生長、周期和凋亡。結(jié)果顯示:聯(lián)合處理比單獨使用5-aza-dC、NaBu以及對照組對細胞抑制作用顯著增強(P＜0.05);5

6、-aza-dC對細胞周期無明顯影響，NaBu和聯(lián)合處理可使細胞顯著阻滯于G0/G1期（P＜0.05）;聯(lián)合處理的正常細胞數(shù)比5-aza-dC和對照組處理均顯著減少(P＜0.05)，而與NaBu組無顯著差異(P＞0.05)，聯(lián)合處理晚期凋亡比5-aza-dC、NaBu以及對照組顯著增加(P＜0.05)，各試驗組早期凋亡無顯著差異。以上結(jié)果說明了聯(lián)合處理組能夠顯著影響細胞生長、周期和凋亡。
　　 3.5-aza-dC和NaBu處理供

7、體細胞對水牛-黃牛異種核移植胚胎的影響
　　 用0.01 mol/L5-aza-dC處理水牛成纖維細胞72h，1.0mmol/L NaBu處理48h，和兩種試劑聯(lián)合處理的細胞進行水牛-黃牛異種核移植，并以未處理組及同種核移植作對照。結(jié)果顯示:水牛-黃牛異種體細胞核移植胚胎的2-細胞，8-16-細胞及囊胚發(fā)育率均顯著低于同種體細胞核移植胚胎(P＜0.05);1.0mmol/L NaBu處理的細胞作為供體細胞進行水牛-黃牛異種體細胞