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1、目的: 通過(guò)用DNA甲基化抑制劑5-氮雜脫氧胞苷誘導(dǎo)乳兔軟骨細(xì)胞凋亡,探討DNA低甲基化在骨關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制中的作用。 方法: 第一代乳兔軟骨細(xì)胞隨機(jī)分為對(duì)照組,5-氮雜脫氧胞苷處理組,分別培養(yǎng)3天。采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率,電鏡觀察5-氮雜脫氧胞苷致軟骨細(xì)胞凋亡的作用,硝酸還原酶法(NO試劑盒)測(cè)定5-氮雜脫氧胞苷作用于軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基上清液中NO含量,免疫印記法(western Blotting)檢測(cè)5-氮雜脫
2、氧胞苷對(duì)軟骨細(xì)胞表達(dá)一氧化氮合酶(iNOS)和Fas蛋白的影響。SPSS軟件統(tǒng)計(jì)分析5-氮雜脫氧胞苷誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞凋亡與其分泌NO、iNOS和Fas蛋白的相關(guān)性。 結(jié)果: 1.隨5-氮雜脫氧胞苷濃度增加和作用時(shí)間延長(zhǎng),軟骨細(xì)胞存活率下降,并呈濃度及時(shí)間依賴(lài)關(guān)系。 2.5-氮雜脫氧胞苷可引起軟骨細(xì)胞發(fā)生凋亡的典型電鏡形態(tài)改變。 3.5-氮雜脫氧胞苷可刺激軟骨細(xì)胞分泌NO。 4.5-氮雜脫氧胞苷可使凋亡
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