miRNA424及其靶基因MEK1和FGFR1在胎兒生長(zhǎng)受限中的作用機(jī)制研究.pdf

1、第一部分miR-424在胎兒生長(zhǎng)受限組和正常對(duì)照組胎盤組織中差異表達(dá)研究
　　目的：本研究分析胎兒生長(zhǎng)受限組(FGR)和正常對(duì)照組胎盤組織中miR-424的表達(dá)水平,探討miR-424與FGR的相關(guān)性,從而闡明miR-424在FGR中的作用,為胎兒生長(zhǎng)受限發(fā)病機(jī)制提供新的思路和途徑,為胎兒生長(zhǎng)早期診斷分子指標(biāo)的篩選奠定基礎(chǔ)。
　　方法：選取25例胎兒生長(zhǎng)受限組(實(shí)驗(yàn)組)和25例正常對(duì)照組胎盤組織,Trizol一步法提取組織中

2、總RNA,鑒定總RNA的質(zhì)量,Real Time-PCR分別測(cè)定胎兒生長(zhǎng)受限胎盤和正常對(duì)照組胎盤組織中miR-424的表達(dá)水平與內(nèi)參基因U6表達(dá)的相對(duì)值,分析miR-424和胎兒生長(zhǎng)受限的相關(guān)性。
　　結(jié)果：①FGR組產(chǎn)婦年齡和孕前體重及孕周與正常對(duì)照組無(wú)顯著性(P>0.05),FGR組新生兒體重明顯低于對(duì)照組(P<0.001);
　?、趹?yīng)用RT-PCR方法分別檢測(cè)了胎兒生長(zhǎng)受限組和正常對(duì)照組胎盤組織中miR-424的表達(dá)水

3、平,與正常對(duì)照組胎盤組織比較,表達(dá)明顯增加。((p=0.002);
　?、踡iR-424可以作為一個(gè)潛在的生物學(xué)標(biāo)志物來(lái)區(qū)分FGR及正常對(duì)照組,其AUC為0.754,靈敏度為88.6％,特異性為68.0%。
　　結(jié)論：miR-424在胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞上表達(dá)豐富,高表達(dá)水平是實(shí)現(xiàn)miRNA-424生物學(xué)功能的基礎(chǔ)。生物學(xué)功能包括調(diào)控細(xì)胞的分化,增殖及血管生成。在胎兒生長(zhǎng)受限組胎盤組織中表達(dá)水平明顯升高的miR-424可能參與了胎兒

4、生長(zhǎng)受限的病理生理的發(fā)生和發(fā)展。
　　第二部分miR-424的靶基因MEK1和FGFR1在胎兒生長(zhǎng)受限中胎盤組織中差異表達(dá)研究
　　目的：探討miR-424的靶基因MEK1和FGFR1在胎兒生長(zhǎng)受限中的差異性表達(dá),探討靶基因絲裂原活化蛋白激酶激酶1(MEK1)和成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體1(FGFR1)與FGR的相關(guān)性,從而闡明在FGR中的作用,為胎兒生長(zhǎng)受限發(fā)病機(jī)制提供新的思路和途徑。
　　方法：采用Real Time-

5、PCR測(cè)定25例胎兒生長(zhǎng)受限患者胎盤組織中靶基因MEK1和FGFR1 mRNA的表達(dá)水平基因與內(nèi)參基因GAPDH mRNA表達(dá)的相對(duì)值,與25例正常胎盤組織中表達(dá)水平相比較。western blotting方法檢測(cè)miR-424的靶基因MEK1和FGFR1在5例胎兒生長(zhǎng)受限及正常對(duì)照胎盤組織中表達(dá)水平,蛋白分析GAPDH作為陰性對(duì)照。
　　結(jié)果：①與正常胎盤組織比較,miR-424靶基因MEK1和FGFR1 mRNA水平明顯降低(

6、P=0.036)。
　?、趙estern blotting方法檢測(cè)miR-424靶基因MEK1和FGFR1蛋白,與正常胎盤組織比較,MEK1和FGFR1蛋白水平明顯降低.
　?、郯攵糠治鲲@示MEK1和FGFR1分別減少75%和60%。
　　結(jié)論：FGFR1和MEK1的功能涉及很多信號(hào)通路,參與細(xì)胞增殖,分化和血管生成,胎盤發(fā)育和胎兒生長(zhǎng)過(guò)程中也存在MEK1和FGFR1 mRNA水平的表達(dá),MEK1和FGFR1 mRN

7、A水平的表達(dá)的降低和胎兒生長(zhǎng)受限的發(fā)病機(jī)制相關(guān),MEK1和FGFR1在胎兒生長(zhǎng)受限的發(fā)生過(guò)程中可能起到一定的作用。
　　第三部分miR-424和靶基因MEK1和FGFR1的相關(guān)性研究及其在胎兒生長(zhǎng)受限中的臨床意義。
　　目的：探討miR-424與其靶基因MEK1和FGFR1的關(guān)系,闡明miR-424和靶基因MEK1和FGFR1的關(guān)系在FGR中的作用,探討FGR的發(fā)病機(jī)制和病因研究。
　　方法：采用Spearman等級(jí)相

8、關(guān)進(jìn)行胎盤組織中miR-424和MEK1的相對(duì)表達(dá)水平的相關(guān)性分析和miR-424和FGFR1的相對(duì)表達(dá)水平的相關(guān)性分析,以及胎盤組織中MEK1與FGFR1表達(dá)之間的相關(guān)性。
　　結(jié)果：①miR-424與MEK1呈明顯負(fù)相關(guān)趨勢(shì)(Spearmanr=-0.667;p=0.001)。表達(dá)上調(diào)的miR-424抑制了MEK1mRNA的表達(dá)。
　?、趍iR-424與FGFR1呈負(fù)相關(guān)趨勢(shì)(Spearmanr=-0.250;p=0.0

9、80),但沒有達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表達(dá)上調(diào)的miR-424抑制了FGFR1 mRNA的表達(dá)。
　?、跢GFR1與MEK1呈顯著的正相關(guān)(Spearmanr=0.34,P<0.0001),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。FGFR1和MEK1 mRNA的有協(xié)同作用。
　　結(jié)論：本研究結(jié)果表明,miR-424的異常高表達(dá)與FGR顯著相關(guān),在FGR的發(fā)生中,miR-424可能通過(guò)抑制FGFR1的轉(zhuǎn)錄后表達(dá)和MEK1轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后表達(dá)而起作用,FGFR1和