骨髓增生異常綜合征發(fā)病機(jī)制及去甲基化治療的相關(guān)研究.pdf

1、第一部分BLU、Dab2和DLEC1基因甲基化在骨髓增生異常綜合征中的研究
　　 目的:通過(guò)對(duì)79例初診和13例經(jīng)地西他濱治療的MDS患者BLU、Dab2和DLEC1基因甲基化狀態(tài)及其與臨床特征之間關(guān)系的研究，明確BLU、Dab2和DLEC1基因在MDS發(fā)生、發(fā)展中的作用。
　　 方法:通過(guò)甲基化特異性PCR和亞硫酸氫鹽測(cè)序方法檢測(cè)MDS骨髓單個(gè)核細(xì)胞中BLU、Dab2和DLEC1基因的甲基化狀態(tài)，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR

2、和Western blot方法檢測(cè)BLU、Dab2和DLEC1基因的表達(dá)。
　　 結(jié)果:MDS患者骨髓BLU、Dab2和DLEC1基因的甲基化率分別為43.0％(34/79)、50.6％(40/79)和46.9％(37/79), BLU、Dab2和DLEC1基因的表達(dá)缺失與其發(fā)生甲基化相關(guān)。RA/RARS/5q-組和RAEB-1/RAEB-2組間的BLU、Dab2和DLEC1基因甲基化率存在顯著差異。中危-2/高危組BLU、Da

3、b2和DLEC1基因甲基化率顯著高于低危/中危-1組MDS病例。Dab2基因啟動(dòng)子甲基化陽(yáng)性率與IPSS積分、染色體核型相關(guān)。地西他濱治療可部分恢復(fù)因甲基化而表達(dá)缺失的BLU、Dab2和DLEC1基因的表達(dá)。
　　 結(jié)論:BLU、Dab2和DLEC1基因是MDS中較為特征性出現(xiàn)的高度甲基化基因，尤其是在中危-2/高危組病例，地西他濱治療可部分逆轉(zhuǎn)BLU、Dab2和DLEC1基因甲基化，使其表達(dá)恢復(fù)。BLU、Dab2和DLEC1基

4、因在MDS疾病的發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用。
　　 第二部分地西他濱對(duì)骨髓增生異常綜合征骨髓單個(gè)核細(xì)胞作用的初步研究
　　 目的:骨髓增生異常綜合征(myelodysplastic syndrome，MDS)是一組異質(zhì)性的惡性克隆性造血干細(xì)胞疾病，胞嘧啶核苷類(lèi)似物地西他濱治療MDS已取得較好療效，約50％的病例取得治療反應(yīng)，治療相關(guān)毒性低，但其作用機(jī)制仍不明確。因此，本研究探討地西他濱對(duì)MDS骨髓單個(gè)核細(xì)胞的體外影響及其可

5、能的機(jī)制。
　　 方法:MDS來(lái)源骨髓單個(gè)核細(xì)胞經(jīng)不同濃度地西他濱處理后，應(yīng)用CCK-8法觀察細(xì)胞增殖狀態(tài)，甲基纖維素培養(yǎng)基培養(yǎng)觀察集落形成能力，Annexin V-FITC/7-AAD雙染法了解細(xì)胞凋亡，碘化丙啶(propidium iodide，PI)單染法測(cè)定細(xì)胞周期，應(yīng)用實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)地西他濱處理前后p15基因轉(zhuǎn)錄水平的變化，采用甲基化特異性PCR法和亞硫酸氫鹽修飾后測(cè)序法檢測(cè)p15基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化水

6、平變化。
　　 結(jié)果:在0～5μM濃度范圍內(nèi)，地西他濱抑制MDS來(lái)源的骨髓單個(gè)核細(xì)胞的增殖作用逐漸增加，但在此濃度范圍內(nèi)未發(fā)現(xiàn)有明顯促凋亡作用和細(xì)胞周期調(diào)節(jié)作用;研究病例骨髓單個(gè)核細(xì)胞經(jīng)3μM地西他濱處理后，集落形成能力減弱;地西他濱處理前MDS病例p15基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化率為58.3％(7/12)，經(jīng)地西他濱處理72h后，其甲基化程度降低，3例病例在3μM地西他濱作用下MSP檢測(cè)結(jié)果轉(zhuǎn)為陰性，mRNA表達(dá)水平較前顯著增

7、加。
　　 結(jié)論:地西他濱在對(duì)MDS來(lái)源骨髓單個(gè)核細(xì)胞具有生長(zhǎng)抑制作用，隨濃度增加抑制率增加，而未發(fā)現(xiàn)顯著促凋亡作用;經(jīng)地西他濱處理后的骨髓單個(gè)核細(xì)胞的集落形成減少;地西他濱處理可部分恢復(fù)因甲基化沉默的p15基因的表達(dá)。
　　 第三部分微小RNA-155在MDS中的表達(dá)及其臨床意義
　　 目的:研究微小RNA-155(miR-155)在MDS患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞中的表達(dá)，分析miR-155的表達(dá)與MDS臨床特征的關(guān)