胰石蛋白減輕胰腺星狀細胞對胰島β細胞的毒性效應.pdf

1、目的:病理研究顯示，2型糖尿病胰島內(nèi)存在纖維化，胰腺星狀細胞是胰島纖維化的主要始動和效應細胞，并且對胰島β細胞具有直接損傷作用。胰石蛋白/再生蛋白(Pancreatic stone protein/regeneration protein，PSP/reg)是再生基因家族的重要成員之一，與胰腺細胞的增殖密切相關。有研究顯示，該蛋白促進胰島β細胞增殖及功能，并且可抑制胰腺星狀細胞活化及其致纖維化能力。本實驗探討PSP/reg對胰腺星狀細胞(

2、Pancreatic Stellate Cell，PSC)胰島β細胞毒性效應的影響。
　　方法:分離培養(yǎng)美國癌癥研究所(Institute of Cancer Research，ICR)小鼠的PSC，在含或不含有PSP/reg的培養(yǎng)液中培養(yǎng)24小時，收集PSC上清(PSC supernatant，PSC-SN)，將MIN-6小鼠胰島β細胞株分別培養(yǎng)在:①無血清培養(yǎng)基、(②含0/30/100/200/300 ng/ml PSP/re

3、g的無血清培養(yǎng)基、③PSC-SN、④PSP/reg干預的PSC-SN(PSP-PSC-SN)、⑤含有100 ng/ml PSP/reg的PSC-SN(PSP+PSC-SN)中24小時。CCK-8比色法觀察不同處理組小鼠胰島β細胞存活率;流式細胞術檢測AnnexinⅤ-FITC&PI雙染細胞比例;葡萄糖刺激的胰島素釋放(Glucose Stimulated Insulin Secretion，GSIS)試驗;胰島素ELISA試劑盒檢測上清

4、胰島素濃度;Western blot法檢測P62、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白的表達。
　　結果:1.CCK-8法檢測PSP/reg組MIN-6小鼠胰島β細胞活力百分比高于對照組，流式細胞術分析結果顯示兩組AnnexinⅤ-FITC&PI雙染細胞比例無明顯差異，GSIS試驗結果顯示PSP/reg組葡萄糖刺激的胰島素釋放濃度高于對照組，WB檢測PSP/reg組P62蛋白含量低于對照組、LC3Ⅱ/Ⅰ比值高于對照組;
　　2.CCK-8法檢測

5、PSC-SN組MIN-6小鼠胰島β細胞活力百分比低于對照組，流式細胞術分析結果顯示PSC-SN組AnnexinⅤ-FITC&PI雙染細胞比例高于對照組，GSIS試驗結果顯示PSC-SN組葡萄糖刺激的胰島素釋放濃度低于對照組，WB檢測PSC-SN組P62蛋白含量低于對照組、LC3Ⅱ/Ⅰ比值高于對照組;
　　3.CCK-8法檢測PSP-PSC-SN組MIN-6小鼠胰島β細胞活力百分比高于PSC-SN組，流式細胞術分析結果顯示PSP-P

6、SC-SN組AnnexinⅤ-FITC&PI雙染細胞比例低于PSC-SN組，GSIS試驗結果顯示PSP-PSC-SN組葡萄糖刺激的胰島素釋放濃度高于PSC-SN組，WB檢測PSP-PSC-SN組P62蛋白含量高于對照組、LC3Ⅱ/Ⅰ比值低于對照組;
　　4.CCK-8法檢測PSP+PSC-SN組MIN-6小鼠胰島β細胞活力百分比高于PSC-SN組，流式細胞術分析結果顯示PSP+PSC-SN組AnnexinⅤ-FITC&PI雙染細胞

7、比例低于PSC-SN組，GSIS試驗結果顯示PSP+PSC-SN組葡萄糖刺激的胰島素釋放濃度高于PSC-SN組，WB檢測PSP+PSC-SN組P62蛋白含量高于對照組、LC3Ⅱ/Ⅰ比值低于對照組。
　　結論:在一定的濃度范圍內(nèi)，PSP/reg濃度依賴性地促進MIN-6細胞存活、胰島素釋放作用及MIN-6細胞的自噬水平，過高濃度的PSP/reg可導致MIN-6細胞的過度自噬，對MIN-6細胞的存活及胰島素釋放產(chǎn)生抑制作用; PSC-

8、SN抑制MIN-6細胞增殖及胰島素釋放，促進MIN-6細胞凋亡，并誘導MIN-6細胞的過度自噬;PSP/reg促進PSC-SN干預的MIN-6細胞存活及胰島素釋放，減少PSC-SN誘導的MIN-6凋亡及過度自噬;此外，PSP/reg干預后的PSC-SN(PSP-PSC-SN)對MIN-6活力及胰島素釋放的的抑制、促進MIN-6凋亡及過度自噬等作用減弱。綜上所述，PSP/reg本身具有增加胰島β細胞活力及功能等作用，還可減輕PSC-SN對