外源性NO供體對SHR胰島β細(xì)胞凋亡及胰腺功能的影響.pdf

1、1.背景與目的：
　　全球的非傳染性疾病流行均呈持續(xù)加重趨，排在首要位置的是心血管疾病、糖尿病、癌癥和慢性呼吸道疾病。2012年5月16日發(fā)布的《2012年世界衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)》報(bào)告指出，全球三分之一成年人患有高血壓，十分之一成年人患有糖尿病。
　　高血壓病的主要靶器官是心腦血管。血管損害是全身性的，一般器官和組織都會有不同程度的受累。近年來的流行病學(xué)研究表明，高血壓患者相比于正常人群患糖尿病的概率要高2-3倍，提示胰腺也可能會受到

2、高血壓一定程度的影響。高血壓患者合并應(yīng)用硝酸酯類藥物的幾率較高，該類藥物是體外NO供體。Kaneto等人發(fā)現(xiàn)，在給予高濃度NO供體時，倉鼠胰島β細(xì)胞株出現(xiàn)凋亡特征。但外源性NO供體對在體胰島功能和胰島β細(xì)胞凋亡的研究還比較少。
　　本實(shí)驗(yàn)用原發(fā)性高血壓大鼠(SHR)及WiStar大鼠分別模擬高血壓病及非高血壓病模型，利用單硝酸異山梨酯做為外源性NO供體，對比SHR及Wistar大鼠凋亡基因、抗凋亡基因及其蛋白的表達(dá)情況，了解β細(xì)胞

3、數(shù)量變化情況，從分子水平上探討高血壓與糖尿病的關(guān)系以及單硝酸異山梨酯對于胰島功能的影響，從而為高血壓人群易發(fā)糖尿病的原因以及臨床的合理化治療提供新的思路。
　　2.材料和方法：
　　2.1、分組
　　16周齡的SPF級SHR(S)大鼠和Wistar(W)大鼠各30只，單硝酸異山梨酯做為體外NO供體，適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后兩類大鼠隨機(jī)分為普通飲食組（S普食、W普食）、高脂飲食+生理鹽水灌胃組（S高脂、W高脂）和高脂飲食+單硝酸

4、異山梨酯灌胃組（S單硝、W單硝）。
　　2.2、胰島功能及大體形態(tài)
　　喂養(yǎng)12周后進(jìn)行靜脈糖耐量試驗(yàn)(IVGTT)以及靜脈胰島素釋放試驗(yàn)(IVIRT);取胰腺組織行HE染色，觀察胰島形態(tài)學(xué)變化。采用硝酸還原酶法測定胰腺組織中的NO;采用比色法測定iNOS。
　　2.3、凋亡基因檢測
　　PCR及Western blot用于觀察胰腺組織中bcl-2及bax的基因及蛋白的表達(dá)。
　　2.4、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

5、　　以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.結(jié)果：
　　3.1、胰腺大體形態(tài)學(xué)變化
　　與Wistar大鼠對比，SHR胰島細(xì)胞體積較大，且SHR胰島內(nèi)部可見到紅細(xì)胞浸潤，單硝酸異山梨酯灌胃組更甚，但胰島結(jié)構(gòu)未見明顯異常。
　　3.2、血糖及胰島素釋放試驗(yàn)
　　SHR與Wistar大鼠空腹血糖(FBG)及空腹胰島素(FINS)水平無差異(P＞0.05);但高脂高糖干預(yù)后，SHR的FBG、FINS和IR值均

6、高于Wistar大鼠，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。單硝酸異山梨酯灌胃組0min，5min，10min，30min血糖都高于其他組大鼠，胰島素抵抗更重。Wistar大鼠僅表現(xiàn)為高脂高糖飲食與普通飲食之間的差別，藥物灌胃組與生理鹽水灌胃組，IVGTT、IVIRT及IR的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　3.3、胰島中NO與iNOS的水平
　　研究發(fā)現(xiàn)，S單硝組大鼠胰腺組織中NO和iNOS含量均高于對應(yīng)的Wistar大

7、鼠，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，S單硝組大鼠胰島組織中NO和iNOS含量高于S高脂組，此種差異未在Wistar大鼠觀察到。同型大鼠間比較，高脂高糖飲食喂養(yǎng)組大鼠胰島組織中NO和iNOS的含量均高于普通飲食組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3.4、β細(xì)胞凋亡相關(guān)基因
　　通過對胰島組織凋亡基因的檢測發(fā)現(xiàn)，高脂高糖喂養(yǎng)組大鼠胰腺組織中Bcl-2表達(dá)下降，Bax表達(dá)水平提高，Bcl-2/Bax比值下降，與普食組對照

8、，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。此外，S單硝組Bcl-2/Bax比值低于S高脂組，表明體外NO供體可通過增加胰腺組織中NO含量最終誘發(fā)胰島β細(xì)胞的凋亡，SHR更容易受到此種影響。
　　4.結(jié)論
　　4.1、高脂高糖飲食可成功誘導(dǎo)胰島素抵抗模型，SHR胰島素抵抗更明顯;
　　4.2、單硝酸異山梨酯加重高脂高糖飲食誘導(dǎo)的大鼠胰島素抵抗及糖代謝異常;
　　4.3、單硝酸異山梨酯可提高SHR胰腺組織中NO濃度，降低抗