Galectin-1在胰腺星狀細胞致胰島β細胞凋亡中的作用.pdf

1、目的：既往研究證實胰島纖維化是2型糖尿?。╰ype 2 diabetes mellitus，T2DM）常見病理特征之一。業(yè)已明確胰腺星狀細胞（pancreatic stellate cell，PSC）是胰腺纖維化進程中的主要效應(yīng)細胞。前期研究發(fā)現(xiàn)活化PSC可抑制胰島β細胞增殖，促進其凋亡。在活化PSC分泌的多種產(chǎn)物中，galectin-1（Gal-1）對細胞的生長、凋亡發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用。本研究擬探討Gal-1在PSC促進胰島β細胞凋

2、亡及影響胰島β細胞胰島素分泌過程中的作用。 方法： 1、運用Western blot檢測活化PSC胞內(nèi)Gal-1的表達及培養(yǎng)上清中Gal-1的分泌；通過免疫熒光染色進一步證實活化PSC表達Gal-1。 2、提取胰腺星狀細胞上清（pancreatic stellate cell-supernatants，PSC-SN），采用50％ PSC-SN干預(yù)Ins-1，并使用20mM Thidigalactoside （TD

3、G）阻斷PSC-SN中Gal-1的作用，電化學發(fā)光免疫分析法（electrochemiluminescent immunoassay，ECLIA）檢測干預(yù)24小時上清中胰島素水平；Annexin Ⅴ-PI標記后行流式細胞術(shù)分析，檢測干預(yù)24小時Ins-1的凋亡水平。 3、采用人重組Gal-1（human recombined galectin-1），分別以0、0．2μg/ml、1．0μg/ml、5．0μg/ml濃度直接干預(yù)體外培

4、養(yǎng)的Ins-1，ECLIA分析Gal-1干預(yù)Ins-1 24小時后上清中胰島素水平；運用流式細胞術(shù)檢測不同濃度人重組Gal-1干預(yù)24小時對Ins-1凋亡的影響。 結(jié)果： 1、Western blot檢測到活化PSC胞內(nèi)表達Gal-1；培養(yǎng)上清中亦存在Gal-1；細胞免疫熒光染色同樣觀察到，活化PSC大量表達Gal-1。 2、50％ PSC-SN干預(yù)Ins-1 24小時后，上清中胰島素量顯著減少（P< 0．01）

5、，該作用可被20mM TDG部分阻斷（P<0．01），而20mM TDG對Ins-1凋亡及胰島素分泌并無影響（P>0．05）；Annexin Ⅴ-PI標記后流式細胞儀分析示50％ PSC-SN誘導Ins-1凋亡率增加（P<0．01），該作用可被TDG部分抑制（P<0．01）。 3、不同濃度人重組Gal-1干預(yù)24小時呈濃度依賴性促進Ins-1凋亡（P<0．01）；抑制Ins-1胰島素表達分泌（P<0．01）。 結(jié)論：Ga