糖化終末產(chǎn)物對(duì)體外培養(yǎng)胰腺星狀細(xì)胞的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、胰腺星狀細(xì)胞是位于胰腺小葉間和腺泡周圍的間質(zhì)細(xì)胞，正常情況下其處于靜息狀態(tài)，僅合成少量的III型膠原等細(xì)胞外基質(zhì)成分，與維持胰腺的正常組織結(jié)構(gòu)有關(guān)。近來研究表明，靜息狀態(tài)的胰腺星狀細(xì)胞在前炎癥細(xì)胞因子、乙醇代謝物和氧化應(yīng)激等損傷因素的作用下可被活化，活化的胰腺星狀細(xì)胞是胰腺細(xì)胞外基質(zhì)形成的主要來源，在胰腺纖維化病變中起著核心作用。有趣的是，研究發(fā)現(xiàn)隨著糖尿病病程的進(jìn)展在胰島周圍的纖維化區(qū)域常伴隨有胰腺星狀細(xì)胞的活化，但其活化的具體機(jī)制還

2、不十分清楚。糖化終末產(chǎn)物水平的升高是糖尿病的重要特征，其能通過特異性受體誘導(dǎo)多種細(xì)胞的轉(zhuǎn)分化和細(xì)胞外基質(zhì)的合成，在糖尿病纖維化病變中起著重要作用。本研究感興趣的是胰腺星狀細(xì)胞是否也是糖化終末產(chǎn)物的靶目標(biāo)？ 第一部分、糖化終末產(chǎn)物受體在胰腺星狀細(xì)胞上的表達(dá)。 目的: 研究胰腺星狀細(xì)胞是否表達(dá)特異性RAGE受體，并探討糖化終末產(chǎn)物對(duì)RAGE表達(dá)的調(diào)節(jié)作用。 方法: 分離培養(yǎng)SD大鼠胰腺星狀細(xì)胞,采用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶

3、鏈反應(yīng)和免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)靜息和活化的胰腺星狀細(xì)胞RAGE在mRNA和蛋白水平的表達(dá)；同時(shí)本實(shí)驗(yàn)用小牛血清制備了外源性糖化終末產(chǎn)物并用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)糖化終末產(chǎn)物對(duì)RAGE mRNA表達(dá)的影響。 結(jié)果: 靜息和活化的胰腺星狀細(xì)胞均表達(dá)RAGE，且活化后表達(dá)水平提高；糖化終末產(chǎn)物能上調(diào)RAGE的表達(dá)。 結(jié)論: 靜息和活化的胰腺星狀細(xì)胞均表達(dá)RAGE，活化的胰腺星狀細(xì)胞RAGE表達(dá)上調(diào)，提示胰腺星狀細(xì)胞是糖化終末產(chǎn)

4、物作用的靶細(xì)胞，且糖化終末產(chǎn)物對(duì)胰腺星狀細(xì)胞的影響可能存在正反饋?zhàn)饔谩?第二部分、糖化終末產(chǎn)物對(duì)體外培養(yǎng)胰腺星狀細(xì)胞的影響及其機(jī)制。 目的：探討糖化終末產(chǎn)物對(duì)大鼠胰腺星狀細(xì)胞活化的影響及其可能機(jī)制。 方法：取第2代細(xì)胞為研究對(duì)象，不同濃度糖化終末產(chǎn)物干預(yù)胰腺星狀細(xì)胞24h后，采用活性氧捕獲劑雙氫溴乙啶和雙氫-乙酰乙酸二氯熒光黃孵育細(xì)胞,分別通過熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的熒光強(qiáng)度來反映細(xì)胞內(nèi)活性氧水平；以α

5、平滑肌激動(dòng)蛋白和I型膠原作為胰腺星狀細(xì)胞活化標(biāo)志，用熒光實(shí)時(shí)定量PCR和蛋白免疫印跡方法檢測(cè)糖化終末產(chǎn)物刺激24h后α平滑肌激動(dòng)蛋白的表達(dá)水平,用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞上清液中I型膠原的分泌。 結(jié)果：糖化終末產(chǎn)物能劑量依賴性的促進(jìn)胰腺星狀細(xì)胞內(nèi)活性氧的產(chǎn)生，而且糖化終末產(chǎn)物刺激后α平滑肌激動(dòng)蛋白和I型膠原的表達(dá)增加，但用N-乙酰半胱氨酸抑制細(xì)胞內(nèi)活性氧水平后二者的表達(dá)水平都明顯下降，差異有顯著性(P<0.05)。 結(jié)論：