胰腺星狀細(xì)胞的分離、培養(yǎng)、鑒定及其早期活化機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：通過腹主動脈插管灌注膠原酶消化分離胰腺星狀細(xì)胞(pancreatic stellate cell，PSC)，建立簡單易行的PSC分離方法，并對PSC進(jìn)行培養(yǎng)和鑒定；初步探討PSC早期活化的機(jī)制。 方法：大鼠腹主動脈插管灌注后，經(jīng)膠原酶消化、Nycodenz密度梯度離心，分離得到PSC；通過觀察細(xì)胞形態(tài)、胞質(zhì)內(nèi)脂滴和免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測結(jié)蛋白(desmin)、神經(jīng)膠質(zhì)酸纖維蛋白(glial fibrillary acidic

2、 protein，GFAP)、α平滑肌肌動素(α-smooth muscle actin，α-SMA)的表達(dá)來鑒定PSC；RT-PCR方法方法及WestBlot方法測定PSC中Smad2/3表達(dá)。 結(jié)果：腹主動脈灌注法分離得到PSC，產(chǎn)率、活力和純度分別為：15.3±4.6×103/g體重、95.0±3.5％、>80％；培養(yǎng)24后大多數(shù)細(xì)胞已貼壁，呈星狀或多角形，48h后表達(dá)desmin、GFAP，并在96h后表達(dá)α-SMA；S