化肝通絡(luò)方對(duì)大鼠活化的肝星狀細(xì)胞增殖的影響及其作用機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　進(jìn)行原發(fā)性膽汁性肝硬化體外研究，探索化肝通絡(luò)方對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞增殖的影響及其作用機(jī)制。
　　方法:
　　1.含藥血清的制備:40只清潔級(jí)SD大鼠隨機(jī)分為化肝通絡(luò)方高劑量組(73.7g/kg/d)、中劑量組(36.8g/kg/d)、低劑量組(18.4g/kg/d)及空白組(0.9％NaCl)，持續(xù)灌胃7天，每天1次，每次2ml，最后1天灌胃之前禁食24h，最后一次灌胃1h后腹主動(dòng)脈采血，靜置，離心，補(bǔ)體滅活，

2、過濾細(xì)菌，分裝，-80℃凍存。
　　2.藥物成分測(cè)定:質(zhì)譜分析藥物組成并與標(biāo)準(zhǔn)品比對(duì)，確定其藥物成分。
　　3.化肝通絡(luò)方對(duì)大鼠活化肝星狀細(xì)胞增殖的影響:MTT法測(cè)定不同組別含藥血清作用于活化肝星狀細(xì)胞24h后，各組之間OD值的改變，確定藥物對(duì)細(xì)胞增殖的影響。
　　4.化肝通絡(luò)方影響活化肝星狀細(xì)胞增殖作用機(jī)制研究:不同組別含藥血清和空白組血清作用于相同條件活化肝星狀細(xì)胞24h，提取蛋白后western blot法檢測(cè)T

3、GF-β1、smad2/3、smad7蛋白質(zhì)的表達(dá)，確定本方對(duì)TGF-β/smad通路的影響。
　　結(jié)果:
　　1.含藥血清制備:質(zhì)譜分析對(duì)照品與中藥原液，確定藥液中含有化肝通絡(luò)方有效成分。
　　2.化肝通絡(luò)方對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞增殖的影響:中藥作用后的細(xì)胞DO值顯著下降，說明本方對(duì)肝星狀細(xì)胞的增殖起到抑制作用，但是低劑量組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，中、高劑量組差異明顯（**P＜0.01）。
　　3.化肝通絡(luò)方影

4、響肝星狀細(xì)胞增殖作用機(jī)制研究:western blot檢測(cè)結(jié)果顯示與空白組相比含藥血清低劑量組TGF-β1、smad2/3蛋白無明顯差異（*P＞0.05），中高劑量組含量下降（*P＜0.05）;含藥血清中高劑量組smad7蛋白表達(dá)明顯上升（*P＜0.05），低劑量組差異不顯(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.化肝通絡(luò)方藥液含有目標(biāo)成分。
　　2.化肝通絡(luò)方含藥血清對(duì)活化肝星狀細(xì)胞增殖活動(dòng)具有抑制作用。
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