冠心病患者氯吡格雷抗血小板活性個(gè)體差異影響因素的研究.pdf

1、目的：
　　 通過(guò)在冠心病患者中研究氯吡格雷抗血小板活性個(gè)體差異，探討遺傳因素和非遺傳因素在藥效差異中的作用；并評(píng)價(jià)遺傳基因多態(tài)性與經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入術(shù)(Percutaneous Coronary Intervention，PCI)后患者不良預(yù)后的關(guān)聯(lián)性。
　　 方法：
　　 (1)臨床收集冠心病患者119例，按臨床實(shí)驗(yàn)方案采集血樣，采用UPLC-MS/MS測(cè)定患者服用300mg負(fù)荷劑量后1小時(shí)活性代謝物血藥濃度，

2、PCR-RFLP法測(cè)定2C19*2/*3、PON1 Q192R、ABCB1 C3435T基因型以及突變敏感性分子開(kāi)關(guān)方法測(cè)定CESIA2 A(-816)C基因型，采用流式細(xì)胞儀測(cè)定血小板血管擴(kuò)張刺激磷蛋白磷酸化（VASP-P）水平作為氯吡格雷特異性藥效學(xué)指標(biāo)，同時(shí)收集患者的基本信息和診療信息，采用多元線性回歸分析遺傳因素和非遺傳因素對(duì)氯吡格雷抗血小板療效的影響。
　　 (2)收集PCI術(shù)支架植入一年內(nèi)出現(xiàn)支架相關(guān)不良心血管事件的

3、患者22例，以及一年內(nèi)未發(fā)生不良事件的患者86例，記錄基本信息并測(cè)定上述基因型，采用卡方檢驗(yàn)分析發(fā)生不良預(yù)后患者的遺傳風(fēng)險(xiǎn)。
　　 結(jié)果：
　　 (1)建立了2C19*2/*3、PON1 Q192R、ABCB1 C3435T、CESIA2 A(-816)C基因型測(cè)定方法，分別隨機(jī)挑選20個(gè)樣本進(jìn)行測(cè)序，結(jié)果一致。進(jìn)一步考察了這些突變位點(diǎn)在中國(guó)漢族健康人群(n=183～204)和冠心病人群(n=153～160)中的分布，健

4、康人群中上述基因型的突變頻率分別為33.88％、6.01%、61.52%、36.34%和23.77%，冠心病人群中分別為34.69%、5.63%、67.81%、39.24%和27.12%，冠心病人群中基因分布與健康人群無(wú)差異(P=0.21～0.82)。
　　 (2)建立了UPLC-MS/MS法測(cè)定人血漿中氯吡格雷活性代謝物血藥濃度的方法并進(jìn)行了方法學(xué)確證，血漿中雜質(zhì)不干擾樣品的測(cè)定，在1～200 ng.mL-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系

5、良好(R2=0.9977)，批內(nèi)批間精密度、回收率、基質(zhì)效應(yīng)、穩(wěn)定性均符合生物樣本檢測(cè)要求。檢測(cè)了19例患者服用300mg負(fù)荷劑量后1小時(shí)活性代謝產(chǎn)物濃度（26.15±24.77ng.mL-1），血藥濃度與PRI之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性(R2=0.33，P=0.01)。
　　 (3)119例冠心病患者中，CYP2C19*2突變基因檢測(cè)有49例*1/*1型(41.18%)，61例*1/*2型(51.26%)，9例*2/*2型(7.560

6、%)，三組基因型患者PRI分別為43.79±18.22、53.72±18.14、61.14±20.86(P=0.004)，*2突變減弱了氯吡格雷抗血小板活性；CYP2C19*3中有106例*1/*1型(89.08%)，13例*1/*3型(10.92%)，無(wú)*3/*3型患者，2C19*3兩組基因型患者PRI分別為49.64±19.68和56.11±12.32(P=0.27)，*3突變型患者的PRI較野生型高，但沒(méi)有顯示出統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。同時(shí)考

7、慮兩個(gè)突變進(jìn)行基因表型分析，其中快速代謝型有44例(36.97%)，中等代謝型有59例(49.58%)，弱代謝型有16例(13.45%)，三組基因表型患者PRI分別為42.54±18.75,53.10±17.80和60.49±17.78(P=0.001)，氯吡格雷在弱代謝型個(gè)體中抗血小板療效最差。
　　 (4) CESIA2A(-816)C基因檢測(cè)61例AA型(53.04%),49例AC型(42.61%),5例CC型(4.35%

8、)。其中AA型與突變型（AC和CC型）兩組患者PRI分別為46.28±18.69和55.31±18.61(P=0.01)，突變降低了氯吡格雷抗血小板作用。
　　 (5)PON1 Q192R基因型檢測(cè)有19例QQ型(15.97%),40例QR型(33.61%)，60例RR型(50.42%)，三組基因型患者PRI分別為50.58±13.98,50.58±19.73和49.81±20.19(P=0.98)：ABCB1 C3435T基因

9、型檢測(cè)有48例CC型(40.34%),54例CT型(45.38%)，17例TT型(14.29%)，三組基因型患者PRI分別為51.55±19.36,50.46±20.32和45.48±13.79(P=0.53)。這兩個(gè)遺傳變異不影響氯吡格雷藥效。
　　 (6)多元線性回歸分析顯示氯吡格雷抗血小板活性差異影響因素包括遺傳因素2C19基因表型和CESIA2基因多態(tài)性，分別可以解釋10%和6.4%的個(gè)體差異；非遺傳因素包括體重、高密度

10、脂蛋白和甘油三酯水平，分別解釋5.1%,3.6%,3%的個(gè)體差異。所有因素共解釋26%的氯吡格雷個(gè)體差異。
　　 (7)通過(guò)22例PCI術(shù)后發(fā)生不良事件的患者和對(duì)照組分析，在病例組中2C19*2突變頻率顯著升高(45.45%vs.29.07%，P=0.03)，至少含有一個(gè)*2突變的患者發(fā)生不良事件的風(fēng)險(xiǎn)較*1/*1型患者高3.25倍(OR=3.25，95%CI:1.10-9.59，P=0.03)；病例組中2C19*3，PON1

11、Q192R，CES1A2A(-816)C，ABCB1 C3435T基因突變頻率與對(duì)照組相比沒(méi)有顯示出統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，其中CES1A2A(-816)C(35.00% vs.24.40%)和PON1 Q192R(77.27% vs.66.28%)在病例組有升高的趨勢(shì)。非遺傳因素分析結(jié)果顯示患者病變血管數(shù)影響患者預(yù)后，多支病變（病變數(shù)≥2）患者發(fā)生不良預(yù)后的風(fēng)險(xiǎn)較單支病變患者高1.44倍(OR=1.44，95%CI:1.07-1.95，P=0.0