冠心病患者CYP2C19基因突變及其在氯吡格雷抗血小板反應(yīng)中的生物活化作用.pdf

1、研究背景：
　　氯吡格雷代謝的關(guān)鍵酶 CYP2C19的不同基因變異會(huì)引起其活性的不同改變，從而導(dǎo)致藥物代謝和藥物功效發(fā)生變化，使得患者對(duì)藥物產(chǎn)生差異反應(yīng)。目前大部分研究主要集中在對(duì) CYP2C19*2、*3、*17等基因多態(tài)性與氯吡格雷代謝相關(guān)性進(jìn)行研究，針對(duì)CYP2C19基因突變與氯吡格雷代謝的相關(guān)性研究及其與氯吡格雷抗血小板凝集功能機(jī)制的體外研究未見(jiàn)報(bào)道。
　　研究目的：
　　本研究主要探索國(guó)人冠心病(CHD)患者

2、CYP2C19基因變異及其對(duì)氯吡格雷抗血小板活性的影響。
　　研究方法：
　　1.根據(jù)CHD指南診斷標(biāo)準(zhǔn)，收集南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院1493例經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈（PCI）術(shù)后口服氯吡格雷和阿司匹林雙聯(lián)抗血小板治療的 CHD患者的基本臨床資料及外周靜脈血標(biāo)本，選取1022例遺傳背景和年齡性別相匹配的健康人群作為對(duì)照。將出血、再發(fā)心絞痛、心肌梗死等不良心血管事件作為終點(diǎn)事件，對(duì)患者平均隨訪時(shí)間為12個(gè)月。
　　2.提取所有患者及健

3、康對(duì)照的DNA樣本，用sanger一代測(cè)序法對(duì)患者及對(duì)照組進(jìn)行CYP2C19基因全外顯子及外顯子和內(nèi)含子交界區(qū)測(cè)序，如在患者中發(fā)現(xiàn)基因變異，通過(guò)與1022例健康人群相比較，以明確是否為基因突變。
　　3.構(gòu)建 CYP2C19基因野生型和突變質(zhì)粒，選擇人正常肝臟細(xì)胞 HL-7702作為目的細(xì)胞。在HL-7702細(xì)胞中轉(zhuǎn)染相同劑量的CYP2C19野生型質(zhì)粒及突變質(zhì)粒。轉(zhuǎn)染24小時(shí)后，收集細(xì)胞。
　　4.提取肝S9蛋白并測(cè)定其濃度

4、，用western blot方法檢測(cè)各組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染量和CYP2C19蛋白表達(dá)量。在質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率一致的前提下，調(diào)整肝S9蛋白濃度，與氯吡格雷共孵育后作用于血小板，運(yùn)用AggRAM血小板聚集儀檢測(cè)血小板聚集率和人血管舒張劑激活磷蛋白(VASP)ELISA試劑盒檢測(cè)VASP水平，了解氯吡格雷對(duì)血小板的抑制情況，在體外對(duì)CYP2C19酶活性變化進(jìn)行分析。
　　研究結(jié)果：
　　1.本研究共發(fā)現(xiàn)CYP2C1980G>T（G27V）、389

5、C>A（T130K）、407T>A（M136K）、831C>A（N277K）、1414G>A（V472I）等5個(gè)基因突變，其中80G>T為新發(fā)突變。這5個(gè)基因突變對(duì)CYP2C19酶活性影響的功能研究未曾見(jiàn)報(bào)道。
　　2.體外功能研究發(fā)現(xiàn)，407T>A基因突變組的血小板聚集率較野生組低48.8％（P＜0.05），同時(shí)，人血管舒張劑激活磷蛋白(VASP)水平相比于野生組高22.0%（P＜0.05），說(shuō)明407T>A突變對(duì)氯吡格雷活化作

6、用強(qiáng)于野生組。然而80G>T、389C>A、831G>A、1414G>T4個(gè)基因突變組的血小板聚集率及VASP水平與野生組無(wú)差異（P均＞0.05）。
　　3.對(duì)患者隨訪結(jié)果顯示，有2例攜帶407T>A突變的患者出現(xiàn)了出血事件，1例攜帶80G>T和1例攜帶1414G>A基因突變的患者分別發(fā)生了心肌梗死和再發(fā)心絞痛事件。
　　結(jié)論：
　　1. CYP2C1980G>T為新發(fā)基因突變。
　　2.首次發(fā)現(xiàn)CYP2C194