冠心病患者血小板miR-223和mir-96差異表達與氯吡格雷反應(yīng)性的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、研究目的：目前大量臨床及實驗研究顯示“抗血小板藥物抵抗”主要與血小板反應(yīng)活性存在個體差異有關(guān)，因此需要對服用抗血小板藥物的患者進行血小板反應(yīng)活性的監(jiān)測。但臨床上對于血小板反應(yīng)活性判定的各種實驗診斷標準尚未達成一致。微小RNA(microRNA，miRNA)是一類在進化上高度保守的單鏈非編碼小RNA，新近研究表明人血小板中含有miRNA，其表達譜差異與血小板功能密切相關(guān)，由此可影響疾病的易感性，特別是血小板反應(yīng)活性的差異。因此本研究的目的

2、是探討冠心病患者血小板microRNA(miR-223，miR-96)表達水平與氯吡格雷反應(yīng)性的關(guān)系，為抗血小板藥物個體反應(yīng)的差異性提供新的分子水平機制及人群研究證據(jù)。
　　研究內(nèi)容與方法：以不穩(wěn)定型心絞痛(Unstable Angina Pectoris，UAP)患者為研究對象。記錄患者的一般臨床資料及用藥情況；進行各項血細胞參數(shù)、生化參數(shù)的檢驗；進行心臟超聲、踝.臂指數(shù)及臂踝脈搏波傳導(dǎo)速度的檢查；進行冠脈造影檢查及必要的介入治

3、療。對冠脈病變進行Gensini評分及Syntax評分。以二磷酸腺苷(Adenosine Diphosphate，ADP)誘導(dǎo)的血小板聚集率和通過流式細胞術(shù)測定的血小板血管舒張劑刺激磷蛋白(Vasodilator Stimulated Phosphoprotein，VASP)磷酸化水平，判斷患者在服用氯吡格雷后血小板反應(yīng)活性的情況。以CD45免疫磁珠去除富血小板血漿中殘留的白細胞后，提取患者血小板中的miRNA，對與血小板P2Y12受體

4、mRNA3’非編碼區(qū)結(jié)合的miR-223，及與血小板小泡締合性微管蛋白8(Vesicle-Associated Microtubule Protein8，VAMP8)表達調(diào)節(jié)相關(guān)的miR-96的表達進行實時定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real Time Polymerase Chain Reaction，realtime PCR)分析。
　　結(jié)果：①所有入選患者根據(jù)流式細胞術(shù)測定的VASP磷酸化水平即血小板反應(yīng)指數(shù)(Platelet Rea

5、ctivity Index，PRI)的中位數(shù)水平(56.55％)分成2組：A組<56.55％，18例，男9例，女9例；B組>55.66％，18例，男7例，女11例。②兩組患者的年齡、性別構(gòu)成、體重指數(shù)及藥物使用情況無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。兩組患者的心血管疾病史、伴發(fā)疾病情況及入院時的血壓、心率無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。兩組患者的心臟功能及結(jié)構(gòu)、ABI、BaPWV、各項血細胞參數(shù)及生化參數(shù)均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。血小板聚

6、集率兩組間有統(tǒng)計學差異(36.64±15.24 vs52.19±13.17，P=0.002)。③兩組患者TIMI分級、Syntax評分及Gensim評分無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。支架長度兩組間有統(tǒng)計學差異(28.22±19.65 vs12.39±15.47，P=0.011)。④PRI與血小板聚集率呈正相關(guān)(r=0.400，P=0.016)。支架長度與Syntax評分呈正相關(guān)(r=0.457，P=0.005)。支架長度與Gensim評

7、分呈正相關(guān)(r=0.497，P=0.002)。Syntax評分與Gensim評分呈正相關(guān)(r=0.660，P=0.000)。⑤與A組比較，B組miR-223相對表達水平下調(diào)，有統(tǒng)計學差異(P=0.0398)；B組miR-96相對表達水平有下調(diào)的趨勢，但無統(tǒng)計學差異(P=0.073)。⑥miR-223相對表達水平與血小板聚集率間無相關(guān)性(r=0.0339，P=0.8513)，與PRI呈負相關(guān)(r=-0.4045，P=0.0328)；miR

8、-96相對表達水平與血小板聚集率間無相關(guān)性(r=0.1473，P=0.4546)，與PRI無相關(guān)性(r=-0.0186，P=0.9251)
　　結(jié)論：本研究入選患者在服用雙聯(lián)抗血小板治療后，血小板反應(yīng)活性存在明顯的個體差異，通過光比濁法檢測的血小板聚集率與流式細胞術(shù)檢測的VASP磷酸化程度的兩種方法均可對治療后血小板反應(yīng)活性進行評估，兩者具有一定的相關(guān)性?？蓪煞N評估方法結(jié)合在一起評價冠心病患者抗血小板治療后血小板的反應(yīng)活性。本研