NGAL膠乳增強(qiáng)免疫比濁法檢測(cè)的評(píng)價(jià)及其在慢性腎病中的診斷應(yīng)用.pdf

1、目的：1.對(duì)膠乳增強(qiáng)免疫比濁法測(cè)定血漿和尿液中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)進(jìn)行方法學(xué)評(píng)價(jià)。2.檢測(cè)不同分期的慢性腎病(CKD)患者血漿及尿液NGAL濃度，以明確血、尿NGAL水平與腎臟損傷的相關(guān)關(guān)系，并評(píng)價(jià)血、尿NGAL作為慢性腎臟病的診斷標(biāo)志物的效應(yīng)。3.建立本實(shí)驗(yàn)室膠乳增強(qiáng)免疫比濁法檢測(cè)血、尿NGAL的參考區(qū)間。
　　方法：1.按照美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)(Clinical and Laboratory Stan

2、dardsInstitute，CLSI)評(píng)價(jià)方案和相關(guān)文件的要求進(jìn)行驗(yàn)證性研究，對(duì)膠乳增強(qiáng)免疫比濁法的不精密度、檢測(cè)限、線性范圍、正確度、抗干擾性和穩(wěn)定性等進(jìn)行評(píng)價(jià)。測(cè)定20例急性腎損傷患者(AKI)、166例慢性腎病患者(CKD)以及100名健康對(duì)照者血漿和尿液中NGAL水平。2.選取2012年5月至2013年12月解放軍總醫(yī)院明確診斷為CKD的患者240例，按照美國(guó)腎臟病與透析病人生存質(zhì)量指導(dǎo)指南(K/DOQI)制訂的CKD分期標(biāo)準(zhǔn)

3、分為6組，即CKD1期組、CKD2期組、CKD3a期組、CKD3b期組、CKD4期組、CKD5期組，應(yīng)用膠乳增強(qiáng)免疫比濁法測(cè)定血、尿NGAL濃度，對(duì)血、尿NGAL在慢性腎病中的應(yīng)用價(jià)值進(jìn)行了系統(tǒng)的橫斷面研究。3.選取2012年6月至2013年12月解放軍總醫(yī)院健康體檢中心的健康體檢者454名，男218名，女236名。按WHO對(duì)青年（21-44歲）、中年（45-59歲）、老年(60-75歲)的定義分為三組，參考美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)(C

4、LSI)相關(guān)文件在臨床醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室中建立可靠參考區(qū)間所用的方法步驟和推薦程序，建立本實(shí)驗(yàn)室膠乳增強(qiáng)免疫比濁法檢測(cè)血、尿NGAL的參考區(qū)間。
　　結(jié)果：1.膠乳增強(qiáng)免疫比濁法測(cè)得NGAL低值和高值的重復(fù)性估計(jì)值為1.90％（低值）和1.22％（高值），實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不精密度為4.06％（低值）和2.57％（高值）;空白限(limit of blank，LoB)為3.1μg/L，血漿NGAL(sNGAL)和尿液NGAL(uNGAL)的檢出限(

5、limit of detection，LoD)分別為12.5和21μg/L，sNGAL和uNGAL檢測(cè)限(limit of quantitation，LoQ)分別為17.8μg/L和29.8μg/L;用膠乳增強(qiáng)免疫比濁法測(cè)定血漿和尿液NGAL在25～4250μg/L的線性良好;sNGAL和uNGAL平均回收率分別為98.89％、98.28％（低值）和102.61％、95.44％（高值）;與國(guó)外同類(lèi)試劑盒相比，測(cè)定結(jié)果基本一致。血紅蛋白≤

6、7 g/L，膽紅素≤0.6 g/L，維生素C≤0.6 g/L，肝素鈉≤5 g/L，內(nèi)脂≤1％時(shí)，對(duì)sNGAL測(cè)定結(jié)果無(wú)顯著性干擾，血紅蛋白≤10 g/L，膽紅素≤0.6 g/L，維生素C≤0.6g/L，uNGAL測(cè)定結(jié)果在可接受范圍內(nèi);試劑穩(wěn)定性良好。AKI組、CKD組血漿和尿液NGAL水平與健康對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;AKI組較CKD組顯著升高。sNGAL、uNGAL的水平均與腎小球?yàn)V過(guò)率估算值(eGFR)成負(fù)相關(guān)（R=-0.7

7、58、-0.692，P均＜0.01）。2.在慢性腎病各分期中，隨著病變程度的增加，eGFR的減少，sNGAL、uNGAL濃度呈明顯升高趨勢(shì)（P＜0.01）。sNGAL、uNGAL水平與eGFR呈明顯負(fù)相關(guān)(P＜0.05)，sNGAL與Cys C、sβ2MG、Urea呈顯著正相關(guān)(P＜0.05)，uNGAL與uα1MG、uβ2MG、ACR同樣存在較高的正相關(guān)（P＜0.05）。sNGAL濃度在CKD3b期組顯著高于CKD3a期組（P＜0.0

8、5）。sNGAL在聯(lián)合GFR和ACR判斷CKD進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)各組間差異均有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），2組uNGAL水平低于3組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.032），3組uNGAL水平顯著低于4+組(P＜0.01)。在ROC曲線分析中，診斷腎功能輕中度惡化時(shí)，血漿標(biāo)本sNGAL同CysC、sβ2MG曲線下面積相似(0.903、0.945、0.937)，高于uNGAL、uβ2MG、uα1MG曲線下面積(0.834，0.788，0.861)

9、;而在診斷腎功能輕度損害中，血漿和尿液標(biāo)本的sNGAL、uNGAL、同CysC、sβ2MG、uβ2MG、uα1MG水平ROC曲線下面積相似(0.819、0.701、0.899、0、900、0.711、0.753)。sNGAL在CKD3-5期的臨床診斷界值為CKD3a期189.5μg/L、CKD3b期222.0μg/L、CKD4期259.0μg/L、CKD5期317.5μg/L。uNGAL能較好地反映腎功能的損傷程度，在CKD4期和5期診

10、斷價(jià)值較高，其診斷界值為254.5μg/L、316.5μg/L。3.健康人群尿液NGAL生物學(xué)參考范圍是uNGAL＜126.0μg/L。血漿NGAL的生物參考區(qū)間為年齡21-44歲:sNGAL＜116.5μg/L;年齡45-75歲:sNGAL＜127.0μg/L。
　　結(jié)論：1.膠乳增強(qiáng)免疫比濁法測(cè)定血漿和尿液NGAL的不精密度符合要求，線性范圍寬，具有自動(dòng)化程度高、檢測(cè)速度快等優(yōu)點(diǎn)。2.腎病患者的血、尿NGAL的水平可以較準(zhǔn)確地