MiR-128在慢性不可預(yù)知應(yīng)激抑郁小鼠腦中的變化以及對下游蛋白的調(diào)控.pdf

1、MicroRNAs（miRNAs）是一類由高等真核生物基因組編碼,類似于siRNA的非編碼RNA分子，大小約20～25個核苷酸，具有高度的序列保守性、時序性和組織特異性。miRNAs對神經(jīng)元的發(fā)生、分化、遷移、融合以及整個腦功能都有重要的作用,但是潛在的機(jī)制仍然不是很清楚。miR-128能夠在成年的神經(jīng)元中表達(dá)，具有高度的時間和空間特異性，通過調(diào)控對應(yīng)的靶mRNA，并影響靶蛋白參與的信號通路，從而調(diào)控細(xì)胞許多重要的生命活動，我們研究發(fā)現(xiàn)

2、在慢性應(yīng)激抑郁小鼠模型中，miR-128基因相對表達(dá)量明顯增加?；|(zhì)相互作用分子2（STIM2）在控制鈣池操縱的鈣離子內(nèi)流（SOCs）通道的激活方面發(fā)揮重要作用，從而能夠長期調(diào)節(jié)鈣離子信號控制的基因轉(zhuǎn)錄，細(xì)胞增殖和生長。在miR-128基因過表達(dá)的慢性不可預(yù)知應(yīng)激抑郁小鼠海馬，STIM2蛋白表達(dá)水平明顯低于對照組。這些結(jié)果表明miR-128分子可能是治療慢性應(yīng)激抑郁的一個潛在治療靶點。
　　目的:探討miR-128分子在慢性不可預(yù)

3、知應(yīng)激抑郁小鼠模型中的變化，并研究其機(jī)制。
　　材料和方法:構(gòu)建慢性不可預(yù)知應(yīng)激(CUMS)抑郁小鼠模型。本實驗采用雄性C57BL/6小鼠，在生活環(huán)境中適應(yīng)一周，首先對全部小鼠進(jìn)行行為學(xué)檢測，比如稱量體重，曠場實驗（OPT），糖水偏好，行為學(xué)結(jié)束后小鼠隨機(jī)分組，然后讓小鼠遭受為期8周的慢性不可預(yù)知應(yīng)激刺激，每周對小鼠進(jìn)行體重稱量，8周后再次對小鼠進(jìn)行OPT檢測和糖水偏好檢測。CUMS小鼠造模成功后,用實時熒光定量PCR方法檢測mi

4、R-128基因的相對表達(dá)水平，用生物信息學(xué)的方法預(yù)測miR-128分子下游靶蛋白，用免疫印跡法驗證靶蛋白的表達(dá)水平，證明miR-128分子與預(yù)測靶蛋白能夠相互作用。在N2a傳代細(xì)胞瞬時轉(zhuǎn)染miR-128重組質(zhì)粒，48h后檢測預(yù)測靶蛋白的表達(dá)是否與動物實驗結(jié)果一致。
　　結(jié)果:正常小鼠遭受8周慢性不可預(yù)知應(yīng)激刺激（CUMS）后，模型組小鼠體重明顯下降；曠場實驗（OPT）檢測結(jié)果顯示，小鼠自主運動行為和探索行為都明顯較少；模型組小鼠糖

5、水?dāng)z取量/小鼠體重明顯低于對照組。實時熒光定量PCR結(jié)果表明miR-128分子的相對表達(dá)水平明顯增多，根據(jù)生物信息學(xué)預(yù)測結(jié)果，STIM2是miR-128分子的下游靶蛋白，用雙熒光素酶報告基因檢測方法證明miR-128分子作用于STIM2-mRNA；提取動物海馬組織，用免疫印跡法證明抑制STIM2蛋白水平的表達(dá)，在N2a傳代細(xì)胞中免疫印跡法也證明了STIM2蛋白相對表達(dá)水平低于對照組。
　　結(jié)論: miR-128在慢性應(yīng)激抑郁小鼠腦