抑郁癥慢性不可預(yù)知應(yīng)激模型大鼠海馬結(jié)構(gòu)有髓神經(jīng)纖維髓鞘改變及氟西汀對其的影響.pdf

1、第一部分:抑郁癥慢性不可預(yù)知應(yīng)激模型大鼠海馬結(jié)構(gòu)有髓神經(jīng)纖維髓鞘損傷的研究
　　目的：探討抑郁癥慢性不可預(yù)知應(yīng)激模型大鼠行為學(xué)及海馬結(jié)構(gòu)CA1和DG有髓神經(jīng)纖維及髓鞘的改變，以期認識抑郁癥行為學(xué)改變的形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)。
　　方法：雄性SD大鼠（4～5周齡，100～150g）120只，先進行適應(yīng)性喂養(yǎng)2周，每籠5只飼養(yǎng)。再調(diào)整糖水偏好基線2周，根據(jù)糖水偏好百分比淘汰糖水偏好水平低于糖水基線的大鼠。將剩余的大鼠按成模率約30％配比，隨

2、機分為空白對照組（n=24）及慢性不可預(yù)知性應(yīng)激模型組（CUS組）（n=72）。CUS組大鼠每籠1只孤養(yǎng)，給予4周慢性不可預(yù)知應(yīng)激。每周均對兩組大鼠進行活動觀察、體重測量和糖水偏好實驗。另外，在造模第4周末進行糖水偏好實驗、曠場實驗和高架十字迷宮實驗。根據(jù)行為學(xué)實驗結(jié)果確定CUS組成模大鼠為12只。造模結(jié)束后，用透射電鏡定性觀察髓鞘超微結(jié)構(gòu)改變，并運用體視學(xué)方法結(jié)合透射電鏡技術(shù)對各組大鼠海馬結(jié)構(gòu)及CA1亞區(qū)和DG總體積、有髓神經(jīng)纖維長度

3、密度及總長度、有髓神經(jīng)纖維體積密度
　　結(jié)果：
　　1.行為學(xué)結(jié)果：經(jīng)過4周應(yīng)激后，CUS組大鼠與空白對照組相比較，體重顯著降低（p=0.010<0.05），糖水偏好明顯下降（p=0.007<0.05）。曠場實驗中CUS組大鼠中央?yún)^(qū)域時間比明顯降低（p=0.040<0.05），中央?yún)^(qū)域路程和中央路程比明顯降低（p=0.024<0.05，p=0.022<0.05）。高架十字迷宮實驗參數(shù)空白對照組和CUS組之間無顯著差異（p>0

4、.05）。
　　2.體積結(jié)果：空白對照組和CUS組大鼠的海馬結(jié)構(gòu)總體積、CA1總體積和DG總體積均沒有顯著性改變（p>0.05）。
　　3.CA1區(qū)有髓神經(jīng)纖維髓鞘結(jié)果：CUS組大鼠海馬CA1內(nèi)有髓神經(jīng)纖維髓鞘出現(xiàn)板層分離、節(jié)段性脫髓鞘等病變。CUS組大鼠海馬CA1內(nèi)有髓神經(jīng)纖維總長度較空白對照組顯著下降24.2%（p=0.045<0.05），總體積顯著下降30.2%（p=0.009<0.05），髓鞘總體積顯著下降41.4%

5、（p=0.044<0.05），軸突總體積顯著下降49.4%（p=0.012<0.05）。CUS組有髓神經(jīng)纖維內(nèi)外直徑、內(nèi)外直徑比、內(nèi)外直徑差/2、內(nèi)外周長、內(nèi)外周長比等髓鞘參數(shù)與空白對照組相比較，均不存在顯著性差異（p>0.05）。CUS組大鼠CA1有髓神經(jīng)纖維髓鞘總體積下降主要是因為髓鞘厚度在0.15μm～0.20μm的有髓神經(jīng)纖維減少所致（p<0.05）。
　　4.DG有髓神經(jīng)纖維髓鞘結(jié)果：CUS組大鼠海馬結(jié)構(gòu)DG可見脫髓鞘現(xiàn)

6、象，但是CUS組大鼠海馬結(jié)構(gòu)DG內(nèi)損傷的有髓神經(jīng)纖維比例（7.21±1.24%）與空白對照組（4.84±1.55%）之間無顯著性差異（p>0.05）。與空白對照組相比較，CUS組有髓神經(jīng)纖維總長度、總體積，髓鞘總體積，軸突總體積，有髓神經(jīng)纖維內(nèi)外直徑、內(nèi)外周長等均不存在顯著性差異（p>0.05）。
　　結(jié)論：本研究發(fā)現(xiàn)為期4周的CUS干預(yù)后雄性SD大鼠出現(xiàn)快感缺失等抑郁樣行為表現(xiàn)。抑郁癥CUS模型大鼠海馬結(jié)構(gòu)內(nèi)存在有髓神經(jīng)纖維節(jié)段

7、性脫髓鞘、髓鞘板層分離等損傷。CUS組大鼠海馬CA1區(qū)有髓神經(jīng)纖維出現(xiàn)脫髓鞘改變。海馬CA1區(qū)的脫髓鞘改變可能參與抑郁癥的發(fā)病過程。
　　第二部分:氟西汀對抑郁癥慢性不可預(yù)知應(yīng)激模型大鼠海馬結(jié)構(gòu)有髓神經(jīng)纖維髓鞘損傷影響的研究
　　目的：進一步探討抗抑郁藥物氟西汀是否能修復(fù)抑郁癥CUS模型大鼠海馬結(jié)構(gòu)CA1區(qū)、CA3區(qū)和DG有髓神經(jīng)纖維髓鞘損傷，并改善抑郁樣行為。
　　方法：雄性SD大鼠（4～5周齡，120～160g）1

8、50只，先進行適應(yīng)性喂養(yǎng)2周，每籠5只飼養(yǎng)。再進行糖水訓(xùn)練，糖水偏好基線穩(wěn)定后，根據(jù)糖水偏好百分比淘汰糖水偏好水平低于糖水基線的大鼠。將剩余的大鼠按成模率約30%配比，隨機分為對照組（n=15）及慢性不可預(yù)知性應(yīng)激模型組（CUS組）（n=113）。CUS組大鼠每籠1只孤養(yǎng)，給予4周慢性不可預(yù)知應(yīng)激。對照組不做任何的干預(yù)。每周測量體重和進行糖水偏好實驗，第4周末根據(jù)糖水偏好實驗結(jié)果篩選出CUS組成模大鼠（n=30），將成模大鼠隨機分為CU

9、S組（n=15）和氟西汀組（n=15）。氟西汀組大鼠腹腔注射5mg/kg氟西汀，CUS模型組和對照組則注射等體積生理鹽水，每天一次，共持續(xù)21d。藥物注射期間，氟西汀組和CUS組繼續(xù)給予慢性不可預(yù)見性應(yīng)激。每周進行大鼠活動觀察、體重測量和糖水偏好實驗。氟西汀干預(yù)最后一周用糖水偏好實驗、曠場實驗、高架十字迷宮實驗檢驗大鼠行為學(xué)改變。行為學(xué)測試結(jié)束后，每組隨機選取5只大鼠進行體視學(xué)定量研究。運用透射電鏡定性觀察髓鞘超微結(jié)構(gòu)改變，并用電鏡技術(shù)

10、結(jié)合無偏體視學(xué)方法測量并計算每只大鼠海馬結(jié)構(gòu)及亞區(qū)CA1、CA3和DG的總體積、海馬結(jié)構(gòu)亞區(qū)有髓神經(jīng)纖維總長度和總體積、髓鞘總體積和軸突總體積、有髓神經(jīng)纖維內(nèi)外直徑和內(nèi)外周長等。
　　結(jié)果：
　　1.行為學(xué)測試果：氟西汀干預(yù)第三周末，氟西汀組的糖水偏好顯著高于CUS組（p=0.045<0.05）；在曠場試驗和高架十字迷宮實驗中，氟西汀干預(yù)三周后沒有明顯改善CUS模型大鼠的自發(fā)活動減少和焦慮樣行為（p>0.05）。另外，與對照

11、組比較，CUS組大鼠在曠場中的5min運動總路程、平均速度明顯減少（p=0.020<0.05）。高架十字迷宮實驗中，與對照組比較，CUS組大鼠5 min開臂滯留時間、開臂滯留時間百分比顯著性下降（p=0.047<0.05，p=0.044<0.05），閉臂滯留時間百分比顯著性增加（p=0.024<0.05）。
　　2.電鏡超微結(jié)構(gòu)結(jié)果：對照組髓鞘結(jié)構(gòu)正常，而CUS組和氟西汀組大鼠海馬結(jié)構(gòu)各亞區(qū)內(nèi)有髓神經(jīng)纖維髓鞘均有出現(xiàn)板層分離、節(jié)段

12、性脫髓鞘等病變。CUS組和氟西汀組大鼠海馬CA3和DG也偶有板層分離、節(jié)段性脫髓鞘現(xiàn)象，而對照組有髓神經(jīng)纖維髓鞘結(jié)構(gòu)完整，損傷的有髓神經(jīng)纖維比例三組之間無顯著性差異（p>0.05）。
　　3.體積結(jié)果：CUS組大鼠CA1區(qū)體積較對照組比較顯著性降低20.0%（F=3.21，p=0.019<0.05），而CA3、DG區(qū)域均無顯著性改變（p>0.05）；氟西汀組與CUS組、對照組之間比較，CA1區(qū)、CA3區(qū)和DG體積均無顯著性差異（p

13、>0.05）；三組之間的海馬結(jié)構(gòu)總體積也無顯著性差異（p>0.05）。
　　4. CA1區(qū)、CA3和DG有髓神經(jīng)纖維髓鞘結(jié)果：CUS組大鼠CA1區(qū)有髓神經(jīng)纖維總長度顯著低于對照組（F=4.112，p=0.027<0.05），CUS組大鼠CA1區(qū)有髓神經(jīng)纖維總體積顯著低于對照組（F=4.192，p=0.015<0.05），而三組之間的髓鞘總體積和軸突總體積無顯著性差異（F=1.217，p=0.330>0.05；F=2.178，p=0

14、.156>0.05），與對照組比較，CUS組的CA1有髓神經(jīng)纖維脫髓鞘主要是髓鞘厚度在0.20μm~0.30μm的的有髓神經(jīng)纖維髓鞘丟失所導(dǎo)致（p<0.05）；CA3和DG的有髓神經(jīng)纖維總長度和總體積，髓鞘總體積和軸突總體積，有髓神經(jīng)纖維內(nèi)外直徑、內(nèi)外周長等參數(shù)，三組之間均不存在顯著性差異（p>0.05）。
　　結(jié)論：經(jīng)過7周應(yīng)激，抑郁大鼠海馬CA1區(qū)出現(xiàn)體積萎縮。氟西汀可以改善抑郁癥CUS模型大鼠的核心癥狀快感缺失，但對抑郁大鼠