心肌缺氧復(fù)氧損傷中轉(zhuǎn)錄因子FoxO4對自噬的影響.pdf

1、目的：
　　觀察心肌細胞缺氧/復(fù)氧（hypoxia/reoxygenation，H/R）損傷情況下轉(zhuǎn)錄因子FoxO4對細胞內(nèi)過度自噬的影響，探討其可能的機制，從而揭示轉(zhuǎn)錄因子FoxO4在心肌細胞H/R損傷情況下的作用。
　　方法：
　　1)以SD大鼠原代心肌細胞為研究對象，取出生1-3天的SD大鼠乳鼠心臟制備原代心肌細胞
　　2)分別缺氧1h、3h、6h、8h、12h、14h、24h，復(fù)氧0h、2h、4h、6h、

2、8h、12h、24h，通過western blot檢測LC3蛋白表達和乳酸脫氫酶（LDH）活性檢測，選擇出合適的缺氧和復(fù)氧時間點，建立缺氧復(fù)氧模型。
　　3)確定好缺氧復(fù)氧條件在缺氧1h及復(fù)氧6h兩個時間點上進行后，設(shè)立5個實驗組：
　　a)對照組：正常培養(yǎng)的原代心肌細胞；
　　b)H/R組：原代心肌細胞培養(yǎng)5天后進行缺氧復(fù)氧處理；
　　c)H/R+陰性干擾病毒組：原代心肌細胞培養(yǎng)2天后，轉(zhuǎn)染陰性干擾病毒，轉(zhuǎn)染3

3、天后進行缺氧復(fù)氧處理；
　　d)H/R+空載病毒組：原代心肌細胞培養(yǎng)2天后，轉(zhuǎn)染空載病毒，轉(zhuǎn)染3天后進行缺氧復(fù)氧處理；
　　e)H/R+FoxO4-RNAi組：原代心肌細胞培養(yǎng)2天后，轉(zhuǎn)染FoxO4-RNAi病毒，轉(zhuǎn)染3天后進行缺氧復(fù)氧處理；
　　f)H/R+FoxO4組：原代心肌細胞培養(yǎng)2天后，轉(zhuǎn)染過表達FoxO4病毒，轉(zhuǎn)染3天后進行缺氧復(fù)氧處理。
　　4)通過Western blo檢測各組FoxO4、LC3、

4、p62蛋白表達情況，并檢測各組LDH活性。實驗數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標準差（x±s)表示，通過統(tǒng)計軟件IBM SPSS Statistics20進行t檢驗，結(jié)果以 p<0.05認為有顯著性差異。
　　結(jié)果：
　　1)心肌細胞經(jīng)缺氧處理1h、3h、6h、8h、12h、14h、24h后，與正常對照組相比，LC3蛋白表達均有升高，在1h上升最明顯（p<0.05）；上清中LDH活性均有升高，與正常組相比均有顯著性差異（p<0.05）。

5、>　　2)心肌細胞經(jīng)缺氧1h復(fù)氧0h、2h、4h、6h、8h、12h、24h，在復(fù)氧6h表達最明顯（p＜0.05）；上清中LDH活性均有升高，與正常組相比均有顯著性差異（p<0.05）。
　　3)分別轉(zhuǎn)染FoxO4-RNAi、FoxO4慢病毒表達載體72h后，對心肌細胞進行H/R處理。H/R組與正常對照組相比，H/R組的LDH活性有顯著升高（p<0.05），差異有統(tǒng)計學(xué)意義。與H/R組相比，H/R+FoxO4組LC3表達、LDH活

6、性均有顯著升高（p<0.05），p62表達有顯著降低（p<0.05），差異均有統(tǒng)計學(xué)意義；H/R+FoxO4-RNAi組LC3表達、LDH活性均有顯著降低（p<0.05），p62表達有顯著升高（p<0.05），差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　1)LC3在正常SD大鼠原代心肌細胞中表達較低，缺氧復(fù)氧損傷下LC3在心肌細胞中的表達增加，在缺氧1h、復(fù)氧6h時表達增加最為明顯，并以此作為本研究的模型。
　　2)缺氧復(fù)氧