薯蕷皂苷對(duì)培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞缺氧-復(fù)氧損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的： 研究薯蕷皂苷(Dioscin，D)對(duì)培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞(cardiomyocyte)缺氧/復(fù)氧損傷(hypoxia/reoxygenationdamage，H/Rdamage)的保護(hù)作用，并探討其作用機(jī)制。 方法： 采用體外培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞，建立缺氧/復(fù)氧損傷模型，以薯蕷皂苷進(jìn)行干預(yù)。心肌細(xì)胞隨機(jī)分為5組：空白對(duì)照組(Control，C)；缺氧/復(fù)氧組(hypoxia/reoxygenation，H/R)；

2、薯蕷皂苷低、中、高劑量干預(yù)組(L、M、H+H/R)。分別觀察各組心肌細(xì)胞搏動(dòng)頻率；MTT法測(cè)心肌細(xì)胞存活率；羅丹明123(Rhodamine123，Rh123)熒光探針標(biāo)記線粒體，檢測(cè)熒光強(qiáng)度以反映心肌細(xì)胞線粒體膜電位(mitochondrialmembranepotential，ΔΨm)變化；脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)缺口末端標(biāo)記法(terminal-deoxynucleotidyltransferasemediatednicken

3、dlabeling，TUNEL)檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡百分率；Fluo-3負(fù)載心肌細(xì)胞，激光掃描共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)鈣離子([Ca2+]i)濃度變化；硝酸還原酶法測(cè)定心肌細(xì)胞培養(yǎng)液中一氧化氮(NO)濃度。 結(jié)果： 1.細(xì)胞搏動(dòng)頻率：與空白對(duì)照組比較，缺氧/復(fù)氧組心肌細(xì)胞搏動(dòng)頻率顯著降低(34.07±5.42vs.99.20±5.51beat/min，P<0.01)；與缺氧/復(fù)氧組比較，薯蕷皂苷各劑量干預(yù)組心肌細(xì)胞搏動(dòng)頻率均顯

4、著升高(34.07±5.42vs.90.45±5.40，34.07±5.42vs.91.18±5.91，34.07±5.42vs.97.27±5.64beat/min，P<0.01)。薯蕷皂苷各劑量干預(yù)組與空白對(duì)照組比較差異無顯著性。 2.細(xì)胞存活率：與空白對(duì)照組比較，缺氧/復(fù)氧組心肌細(xì)胞存活率顯著降低(32.83±5.00vs.98.50±0.80％，P<0.01)：與缺氧/復(fù)氧組比較，薯蕷皂苷各劑量干預(yù)組心肌細(xì)胞存活率均顯著

5、升高(32.83±5.00vs.84.41±2.77，32.83±5.00vs.85.54±2.57，32.83±5.00vs.93.83±3.65％，P<0.01)。薯蕷皂苷各劑量干預(yù)組與空白對(duì)照組比較差異無顯著性。 3.線粒體膜電位(△Ψm)：與空白對(duì)照組比較，缺氧/復(fù)氧組△Ψm顯著降低(3.0±1.1vs.5.7+0.5×105，P<0.01)；與缺氧/復(fù)氧組比較，薯蕷皂苷各劑量干預(yù)組ΔΨm均顯著升高(3.0±1.1vs.

6、5.3±1.3，3.0±1.1vs.5.5±1.7，3.0±1.1vs.5.5±1.6×105，P<0.01)。薯蕷皂苷各劑量干預(yù)組與空白對(duì)照組比較差異無顯著性。 4.心肌細(xì)胞調(diào)亡指數(shù)(M)：與空白對(duì)照組比較，缺氧/復(fù)氧組心肌細(xì)胞調(diào)亡指數(shù)明顯升高，從28.51±3.88％上升到88.71±3.51％(P<0.01)；與缺氧/復(fù)氧組比較，薯蕷皂苷各劑量干預(yù)組心肌細(xì)胞調(diào)亡指數(shù)均顯著降低(28.51±3.88vs.47.8±4.5，P

7、<0.05；28.51±3.88vs.39.19±2.56，28.51±3.88vs.33.62±4.08％，P<0.01。薯蕷皂苷各劑量干預(yù)組與空白對(duì)照組比較差異無顯著性。 5.心肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子([Ca2+]i)熒光強(qiáng)度：與空白對(duì)照組比較，缺氧/復(fù)氧組心肌細(xì)胞[Ca2+]i熒光強(qiáng)度明顯加強(qiáng)(1887.21±692.51vs.681.58±260.94，P<0.01)；與缺氧/復(fù)氧組比較，薯蕷皂苷各劑量干預(yù)組心肌細(xì)胞[Ca2+]

8、i熒光強(qiáng)度顯著減弱(1887.21±692.51vs.1196.37±582.75，1887.21±692.51vs.1130.97±694.56，P<0.05；1887.21±692.51vs.907.40±414.91，P<0.01)。薯蕷皂苷各劑量干預(yù)組與空白對(duì)照組比較差異無顯著性。 6.心肌細(xì)胞NO濃度：心肌細(xì)胞在一般情況下即會(huì)自發(fā)分泌一定量NO。缺氧/復(fù)氧環(huán)境未能刺激NO分泌量發(fā)生顯著變化。缺氧開始后2h，缺氧/復(fù)氧組

9、NO合成顯著性增加(48.37±12.85vs.79.32±6.71μmol/L，P<0.01)；缺氧后7h，NO合成激增，可達(dá)對(duì)照組的3.9倍(48.37±12，85vs.187.65±18.63μmol/L，P<0.01)。 結(jié)論： 從細(xì)胞水平初步證實(shí)，薯蕷皂苷對(duì)缺氧/復(fù)氧損傷的培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞具有重要的保護(hù)作用，保護(hù)機(jī)制可能涉及以下幾方面： 1.升高受損心肌細(xì)胞的線粒體膜電位，維護(hù)膜的完整性； 2.