自噬在七氟烷預(yù)處理對缺氧復(fù)氧損傷大鼠心肌細胞延遲性保護中的作用.pdf

1、目的：
　　 觀察七氟烷預(yù)處理延遲性保護(SWOP)對大鼠心肌細胞缺氧復(fù)氧(H/R)損傷的影響，探討自噬在七氟烷SWOP對WR損傷心肌細胞延遲性保護中的機制。
　　 方法：
　　 H9c2大鼠心肌細胞隨機分為5組，CON組、H/R組(缺氧2 h，復(fù)氧1 h)、七氟烷預(yù)處理延遲性保護組(SWOP組，給予2.5％七氟烷SWOP1 h，間隔24 h后進行H/R)、自噬抑制劑組(3-MA組，在培養(yǎng)基內(nèi)加入終濃度為10 m

2、M3-MA培養(yǎng)1h，間隔24 h后進行H/R)、3-MA+SWOP組(2.5％七氟烷SWOP前15 min給予10mM3-MA，間隔24 h后進行H/R)。實驗結(jié)束后取心肌細胞，MTT法檢測細胞存活率，流式細胞儀檢測凋亡率，采用透射電鏡觀察細胞內(nèi)自噬小體和凋亡的變化，Western Blot法檢測LC3-Ⅱ、Beclin1和Bcl-2的蛋白表達。
　　 結(jié)果：
　　 細胞存活率和凋亡率：與H/R組相比，SWOP組、3-M

3、A組和3-MA+SWOP組心肌細胞存活率增加(P<0.05)，凋亡率減少(P<0.05)。
　　 電鏡結(jié)果：H/R組心肌細胞內(nèi)溶酶體被激活，自噬和凋亡同時存在，SWOP組自噬小體和溶酶體減少。
　　 Western blot結(jié)果：與CON組相比，H/R組和SWOP組LC3-Ⅱ、Beclin1表達上調(diào)(P<0.05)；與H/R組相比，SWOP組LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白上調(diào)幅度降低(P<0.05)，SWOP組、3-MA