青霉素致貓運動區(qū)急性局灶性癲癇模型制作及其發(fā)作機制研究.pdf

1、目的：癲癇是由各種原因引起的腦功能障礙綜合征，即腦細(xì)胞群異常放電所致的發(fā)作性、暫時性的腦功能紊亂，具有反復(fù)性、陣發(fā)性、發(fā)作性等特點。當(dāng)癇灶涉及功能區(qū)時，可出現(xiàn)運動、感覺、視覺、聽覺、語言等方面的功能障礙，甚至伴有行為、意識及自主神經(jīng)功能障礙。由于其發(fā)作沒有預(yù)見性，發(fā)作的程度也不能人為控制，治療較為困難。自從1883年Openchowski shouci首次采用冷凍大腦組織造成腦內(nèi)致癇灶起，癲癇的實驗性研究已有100多年。從果蠅到靈長類，

2、癲癇的動物模型也是多種多樣，數(shù)目繁多。盡管癲癇動物模型種類繁多，并且在癲癇實驗研究中起著非常關(guān)鍵性作用，但造成癲癇的遺傳和獲得性因素十分復(fù)雜，遠(yuǎn)非任何一種動物模型所能代表。另外，目前國內(nèi)外研究的急性或慢性癲癇模型多局限于顳葉及海馬，對于運動區(qū)的研究由于許多因素的影響還較少見。針對上述情況，本實驗采用貓作為實驗動物，擬通過青霉素這種藥物建立確切、穩(wěn)定的運動區(qū)癲癇模型，就該模型制作、術(shù)中麻醉劑應(yīng)用劑量、致癇青霉素劑量、癲癇發(fā)作情況、相應(yīng)腦電

3、圖、行為學(xué)及病理學(xué)變化進(jìn)行觀察，探討其發(fā)病機理，為運動區(qū)癲癇的實驗研究與臨床治療提供幫助。 方法： 1 采用正常成年家貓建立青霉素急性局限性點燃型運動區(qū)癲癇模型。取健康家貓15只，隨機分為兩組，其中致癇組12只，運動區(qū)皮層注射1萬單位青霉素；對照組3只，運動區(qū)皮層注射生理鹽水。 2 應(yīng)用MS4000U生物信號定量記錄分析系統(tǒng)分別于致癇即刻、1小時、3小時、1天、3天、6天記錄致癇組動物腦電圖變化并與正常組比較

4、。 3 觀察致癇組動物相應(yīng)的行為學(xué)改變。 4 使用分光光度法檢測兩組動物腦組織內(nèi)氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)含量，進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。 5 分別對對照組及致癇組(致癇即刻、1小時、3小時、1天、3天、6天)貓腦組織進(jìn)行HE及免疫組化染色，使用光學(xué)顯微鏡和HPIAS-1000高清晰度彩色病理圖文分析系統(tǒng)對石蠟切片進(jìn)行病理學(xué)觀察，進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。 6 使用SPSS10.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。 結(jié)果： 1．通

5、過對家貓麻醉時間、深度、及致癇情況研究，發(fā)現(xiàn)異丙酚持續(xù)靜脈微量泵泵入麻醉(3～7μg/kg.min)效果較好、蘇醒快且此劑量足以達(dá)到鎮(zhèn)靜效果而不影響試驗動物的腦電圖棘慢波的描記，可順利完成所有手術(shù)操作及腦電圖記錄。 2．青霉素致癇以1萬單位皮層內(nèi)約1mm注入可出現(xiàn)癇樣放電；當(dāng)劑量大于1萬單位動物出現(xiàn)癲癇持續(xù)陣攣發(fā)作且不易存活；當(dāng)劑量小于1萬單位誘發(fā)不出癲癇波且無癥狀；所以在實驗中選擇10，000單位作為注射劑量，這樣有充足的時間

6、觀察手術(shù)后癲癇發(fā)作情況及行為學(xué)的變化。 3．腦電監(jiān)測顯示：青霉素1萬單位注射至皮層下1mm所致動物模型為急性局限性癲癇模型，青霉素1萬單位致癇持續(xù)時間為3.37～5.02天。 4．青霉素皮層注射可以導(dǎo)致腦組織內(nèi)氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)含量改變，即興奮性氨基酸GLU增多，抑制性氨基酸γ-GABA減少，從而出現(xiàn)癇樣放電。 結(jié)論： 1．青霉素作為一種急性、快速致癇劑，通過局部皮層給藥，所建立的貓急性局灶性癲癇模型穩(wěn)

7、定、確切，動物電生理學(xué)觀察表現(xiàn)為局部導(dǎo)聯(lián)和全導(dǎo)的棘波、棘慢波； 2．異丙酚持續(xù)靜脈微量泵泵入麻醉(3-7 μg/kg．min)效果較好、蘇醒快且此劑量足以達(dá)到鎮(zhèn)靜效果而不影響試驗動物的腦電圖棘慢波的描記，可順利完成所有手術(shù)操作及腦電圖記錄。 3．行為學(xué)改變：致癇動物3天內(nèi)精神萎靡，攝食較差，活動少，伴有或不伴有對側(cè)肢體的陣攣，3～4天后恢復(fù)正常。 4．癇樣放電系指腦電圖記錄到的不同于背景活動的波或復(fù)合波，對診斷

8、起重要作用。本實驗動物模型腦電出現(xiàn)棘波及棘慢復(fù)合波，持續(xù)3.38～5.01天，說明腦組織存在癇樣放電。 5．氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的平衡紊亂是癲癇發(fā)生的重要病理基礎(chǔ)。本實驗檢測興奮性氨基酸(谷氨酸GLU)和抑制性氨基酸(γ-氨基丁酸γ-GABA)含量及其比值，發(fā)現(xiàn)興奮性氨基酸(谷氨酸GLU)含量增多，抑制性氨基酸(γ-氨基丁酸γ-GABA)含量減少，本模型上述氨基酸含量與正常組比較有顯著差別，故青霉素致癇與氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的平衡紊亂有