致敏性青霉素降解物的酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法研究.pdf

1、目前青霉素酶解產(chǎn)物沒有有效的檢測(cè)手段，但其對(duì)人體的致敏危害更嚴(yán)重，因此建立一種簡(jiǎn)單、快速的青霉素降解物酶聯(lián)免疫分析方法具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。本論文建立了針對(duì)青霉素酶解產(chǎn)物的酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法，可有效地對(duì)牛奶中的青霉噻唑酸進(jìn)行快速地分析。
　　 根據(jù)青霉噻唑酸及青霉素G的結(jié)構(gòu)特征，設(shè)計(jì)合成青霉噻唑酸人工抗原，免疫獲得的青霉噻唑酸多克隆抗血清效價(jià)高達(dá)1:240000，100μg L-1青霉噻唑酸的抑制率為52.67％。利用Proton

2、A-Sepharose4B親和層析柱純化抗體后，通過對(duì)抗體包被量、酶標(biāo)抗原用量、樣本稀釋液pH和離子強(qiáng)度等參數(shù)的優(yōu)化，建立了一種簡(jiǎn)便、快速的直接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法。此法具有較高的靈敏度，IC50為0.320±0.012μg L-1，檢測(cè)限IC15為0.031±0.002μg L-1，且穩(wěn)定性好，板內(nèi)變異0.85～7.81％，板間變異1.33～10.10％。進(jìn)一步考察了樣品的基質(zhì)影響及其消除方法，牛奶和奶粉經(jīng)離心和稀釋即可消除基質(zhì)影響，

3、無需有機(jī)溶劑或液液萃取、固相萃取等凈化手段，樣品加標(biāo)回收率為72.75～93.25％，可滿足快速篩選方法的要求。
　　 通過高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用，對(duì)建立的青霉噻唑酸直接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法的準(zhǔn)確性進(jìn)行了驗(yàn)證。兩種方法檢測(cè)結(jié)果具有較高的相關(guān)性，線性相關(guān)系數(shù)R2值為0.9977。
　　 研究了牛奶熱處理對(duì)青霉噻唑酸ELISA方法的影響，結(jié)果表明添加降解物的牛奶經(jīng)過不同熱處理對(duì)檢測(cè)結(jié)果沒有影響，顯示該方法具有良好的適用性。采用