綠豆過敏原酶聯(lián)免疫檢測方法的研究.pdf

1、目前國內(nèi)外還沒有對綠豆過敏原檢測方法的報道，但其對敏感人群的致敏危害嚴(yán)重。因此建立一種簡單、快速的綠豆過敏原酶聯(lián)免疫檢測方法具有重要的現(xiàn)實意義。本論文通過實驗研究建立了綠豆過敏原的酶聯(lián)免疫檢測方法。
　　首先從綠豆中提取綠豆蛋白，通過SDS-PAGE分析得到主要的綠豆蛋白分子量50，38，34和25kDa，用考馬斯亮藍(lán)G-250法對得到的蛋白定量。通過免疫BALB/c小鼠建立綠豆蛋白致敏模型，得到效價最高的一組為用弗氏佐劑，經(jīng)皮下

2、注射，并且第4次免疫14天后采全血組的抗血清，效價達(dá)1∶64000。免疫新西蘭大耳白兔，獲得效價達(dá)1∶32000的綠豆蛋白多克隆抗血清。采用免疫印跡法分析鼠抗綠豆蛋白抗血清和兔抗綠豆蛋白抗血清的親和性，得到兩種抗血清與蛋白在50和25kDa有強的結(jié)合。與九種蛋白的交叉反應(yīng)結(jié)果顯示，抗體的特異性較高。
　　然后通過對免疫分析條件的優(yōu)化，建立了靈敏的雙抗體夾心酶聯(lián)免疫檢測方法。包被捕獲抗體0.5μg/well，0.5％脫脂乳粉作為封閉

3、液，從5μg/mL開始2倍梯度稀釋綠豆蛋白，用PBS1∶20000倍稀釋檢測抗體，HRP標(biāo)記羊抗鼠二抗1∶10000倍稀釋，室溫顯色20min。此法具有較高的靈敏度，檢測限為4.99ng/mL。準(zhǔn)確度高，樣品加標(biāo)回收率為80.35％-88.41％。且穩(wěn)定性好，板內(nèi)變異1.58％-3.78％，板間變異3.14％-6.41％。
　　進(jìn)一步考察了熱加工過程對食品過敏原結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性的影響。在干熱加工條件下，綠豆蛋白和綠豆粉的熱加工相比較可以