甲氨蝶呤誘導(dǎo)色素沉著絨毛結(jié)節(jié)性滑膜炎滑膜細胞凋亡的研究.pdf

1、目的：研究色素沉著絨毛結(jié)節(jié)性滑膜炎（Pigmented Villonodular Synovitis，PVNS）患者滑膜細胞生物學(xué)特性及甲氨蝶呤（Methotrexate，MTX）對色素沉著絨毛結(jié)節(jié)性滑膜炎滑膜細胞增殖和凋亡的影響，探討甲氨蝶呤治療色素沉著絨毛結(jié)節(jié)性滑膜炎的前景。 方法：通過滑膜組織病理求證滑膜性質(zhì)，膠原酶消化法分離色素沉著絨毛結(jié)節(jié)性滑膜炎病人滑膜細胞，用含10％胎牛血清的D-MEM培養(yǎng)液進行培養(yǎng)。培養(yǎng)一周后通過

2、倒置相差顯微鏡和HE染色觀察色素沉著絨毛結(jié)節(jié)性滑膜炎病人滑膜細胞形態(tài)學(xué)特性?；ぜ毎ㄟ^超微透射電鏡進行鑒定。MTT法連續(xù)7天檢測色素沉著絨毛結(jié)節(jié)性滑膜炎和骨性關(guān)節(jié)炎滑膜細胞增殖活力，采用第3代滑膜細胞觀察藥物的作用，實驗分為4組：實驗分成不同濃度的MTX藥物處理組、未加藥的空白對照組設(shè)MTX濃度為0μmol/L。體外培養(yǎng)的PVNS滑膜細胞空白對照組和MTX藥物處理組加藥后分別于48h、96h、144h用MTT比色法檢測MTX對PVNS

3、滑膜細胞增殖的抑制率，流式細胞儀檢測MTX處理48 h后對細胞凋亡的影響。 結(jié)果：通過病理證實取材標本為色素沉著絨毛結(jié)節(jié)性滑膜炎滑膜組織，倒置顯微鏡下和HE觀察發(fā)現(xiàn)色素沉著絨毛結(jié)節(jié)性滑膜炎滑膜細胞增殖速度較骨性關(guān)節(jié)炎滑膜細胞快，透射電鏡鑒定本實驗分離的滑膜細胞為PVNS滑膜細胞；MTT測定結(jié)果顯示PVNS滑膜細胞體外培養(yǎng)其增殖活力明顯高于骨性關(guān)節(jié)炎滑膜細胞（p<0.05）。MTT的檢測結(jié)果顯示：與空白對照組相比，不同濃度的MTX

4、均顯著抑制PVNS滑膜細胞的增殖，（p<0.05），且呈時效和量效關(guān)系；MTX體外作用PVNS滑膜細胞48h后可見凋亡細胞，MTX0μmol/L組、0.5μmol/L組、1μmol/L組、2μmol/L組細胞凋亡率分別為6.34±2.05、6.87±3.34、7.45±2.19、8.79±2.59。中高濃度MTX藥物處理組細胞凋亡率均與空白對照組有差異（p<0.05），且與藥物濃度成正相關(guān)。 結(jié)論：色素沉著絨毛結(jié)節(jié)性滑膜炎滑膜細