甲氨蝶呤聯(lián)合環(huán)磷酰胺對CIA大鼠滑膜細(xì)胞凋亡作用的研究.pdf

1、目的： 本實驗通過給予RA動物模型膠原誘導(dǎo)型關(guān)節(jié)炎(collagen induced arthritis，CIA)大鼠甲氨蝶呤(Methotrexate MTX)、環(huán)磷酰胺(Cyclophosphamide CTX)及兩者聯(lián)合治療，觀察其對大鼠滑膜細(xì)胞凋亡的影響，以探討其聯(lián)合的協(xié)同機制。 方法： 1．建立Ⅱ型膠原誘導(dǎo)的雌性Wistar大鼠CIA模型，將造模成功的60只大鼠隨機分成B組：CIA模型對照組、C組：小劑

2、量MTX治療組(0.9mg.kg-1.w-1)、D組：小劑量CTX治療組(24mg.kg-1.3w-1)及E組：小劑量MTX聯(lián)合小劑量CTX治療組(0.9mg.kg-1.w-1+24mg.kg-1.3w-1)；同時選取8只作為A組：正常對照組；即6組。 2．動態(tài)觀察接受不同治療各組CIA大鼠一般情況及關(guān)節(jié)炎癥狀，關(guān)節(jié)炎指數(shù)(Axthritis Index AD)，影像學(xué)改變。 3．治療24周后全部動物處死取材，再經(jīng)固定、

3、脫鈣、包埋，制成切片。然后各組大鼠做HE染色觀察滑膜組織病理學(xué)改變，進(jìn)一步采用TUNEL法檢測滑膜細(xì)胞凋亡。 結(jié)果： 1．CIA造模成功率達(dá)66.67％(60/90)；通過癥狀、影像學(xué)、病理學(xué)判斷評估證實造模成功，為慢性關(guān)節(jié)炎，可持續(xù)24周。 2．關(guān)節(jié)炎指數(shù)AI:各治療AI均較模型組明顯改善，聯(lián)合組優(yōu)于小劑量MTX、CTX組(P<0.05)。 3．HE關(guān)節(jié)病理改變：CIA模型組大鼠的滑膜層次增多，可達(dá)4～

4、6余層，排列紊亂，大量炎性細(xì)胞浸潤，軟骨、骨組織嚴(yán)重侵蝕；小劑量MTX、CTX治療組滑膜炎癥、軟骨、骨組織侵蝕有所減輕；聯(lián)合治療組滑膜炎癥、軟骨、骨組織侵蝕明顯改善。 4．TUMEL檢測在滑膜組織中，凋亡核呈深棕色者為陽性。造模后CIA大鼠關(guān)節(jié)滑膜凋亡增加，各治療組滑膜細(xì)胞數(shù)與CIA組比較增加，Low-dose MTX+Low-dose CTX組滑膜細(xì)胞凋亡與CIA組比較明顯增加。平均灰度值與染色程度呈反比，聯(lián)合治療組原位滑膜細(xì)

5、胞凋亡平均灰度值比其他各組均低，聯(lián)合治療組滑膜細(xì)胞凋亡程度最高(P<0.01)。經(jīng)析因設(shè)計方差分析，滑膜細(xì)胞凋亡平均灰度值顯示MTX與CTX有交互作用(P<0.05)聯(lián)合治療組優(yōu)于單用藥小劑量治療組(P<0.05)。 結(jié)論： 1．在CIA大鼠模型中滑膜異常增殖。 2．各治療組滑膜細(xì)胞凋亡數(shù)與CIA組比較增加(P<0.05)，聯(lián)合治療組在改善關(guān)節(jié)癥狀、改善滑膜病理改變，誘導(dǎo)滑膜細(xì)胞凋亡，均優(yōu)于單用藥組即小劑量MTX