甲氨蝶呤聯(lián)合環(huán)磷酰胺對(duì)Wistar大鼠淋巴細(xì)胞細(xì)胞周期和凋亡的影響.pdf

1、研究背景和目的: 類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)有許多類(lèi)腫瘤的特性，其發(fā)病機(jī)制與滑膜細(xì)胞、淋巴細(xì)胞的細(xì)胞周期失控和凋亡異常密切相關(guān)。我們受血液病(白血病)治療策略的啟發(fā)，在治療RA的臨床實(shí)踐中，依據(jù)腫瘤聯(lián)合化療的理論，聯(lián)合細(xì)胞周期特異性藥物甲氨蝶呤(MTX Methotrexate)與周期非特異性藥物環(huán)磷酰胺(CTX Cyclophosphamidc)小劑量間歇給藥治療RA，回顧性分析初步顯示此聯(lián)合方案療效顯著，副作用低。檢索國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)，

2、目前尚無(wú)根據(jù)細(xì)胞動(dòng)力學(xué)原理聯(lián)合免疫抑制劑治療RA的理念。 本課題通過(guò)研究MTX、CTX及兩藥聯(lián)合對(duì)正常Wistar大鼠外周血淋巴細(xì)胞(PBL)細(xì)胞周期、凋亡率的影響，探討兩藥聯(lián)合是否具有協(xié)同作用；通過(guò)檢測(cè)PBL和免疫器官脾臟的細(xì)胞周期蛋白D1(CyclinD1)的表達(dá)水平，闡明聯(lián)合方案是否通過(guò)CyclinD1途徑實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞周期的影響。并初步探討兩藥聯(lián)合的可能機(jī)制，為臨床用藥提供理論依據(jù)。 方法: 1、成年Wist

3、ar大鼠隨機(jī)分為四組：正常對(duì)照組、小劑量MTX組、小劑量CTX間歇給藥組、聯(lián)合用藥組(小劑量MTX+小劑量CTX間歇給藥)。 2、分別于給藥3周、9周、18周、27周后采集外周血，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)PBL的細(xì)胞周期、凋亡率及CyclinD1表達(dá)水平。 3、給藥27周后解剖大鼠，應(yīng)用免疫組化檢測(cè)脾臟組織CyclinD1的表達(dá)。 結(jié)果: 1、對(duì)細(xì)胞周期各期細(xì)胞比例的影響：小劑量MTX組PBL G0/

4、G1期細(xì)胞比例明顯高于正常對(duì)照組(P<0.05)，S期細(xì)胞比例明顯低于正常對(duì)照組(P<0.05)；小劑量CTX組對(duì)PBL各期細(xì)胞比例影響不大；聯(lián)合用藥組與小劑量MTX組比較，G0/G1期細(xì)胞比例明顯降低(P<0.05)，S期細(xì)胞比例明顯升高(P<0.05)；經(jīng)析因設(shè)計(jì)的方差分析顯示兩藥對(duì)G0/G0期、S期細(xì)胞比例的影響表現(xiàn)為拮抗作用(P<0.05)；各采血時(shí)點(diǎn)間對(duì)PBL細(xì)胞周期各期細(xì)胞比例的影響無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 2、對(duì)凋亡的影響：

5、兩單用藥組PBL凋亡率與正常對(duì)照組比較均明顯升高，聯(lián)合用藥組增高更為顯著(P<0.05)，經(jīng)折因設(shè)計(jì)的方差分析顯示兩藥對(duì)PBL凋亡率的影響有協(xié)同作用(P<0.05)。各采血時(shí)點(diǎn)間對(duì)PBL凋亡率的影響無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 3、對(duì)CyclinD1表達(dá)的影響：不同用藥組PBL CyclinD1的表達(dá)和脾臟CyclinD1免疫組化的平均光密度均值均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。各采血時(shí)點(diǎn)間對(duì)PBL CyclinD1表達(dá)的影響無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 4、PBL

6、 CyclinD1的表達(dá)與G0/G1期細(xì)胞比例呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，脾臟CyclinD1免疫組化的平均光密度均值與相應(yīng)時(shí)點(diǎn)PBL G0/G1期細(xì)胞比例呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。 結(jié)論 1、小劑量MTX對(duì)大鼠PBL的影響主要表現(xiàn)為細(xì)胞周期G<,0>/G<,1>→S期轉(zhuǎn)換延緩作用，也可誘導(dǎo)凋亡。 2、小劑量CTX對(duì)大鼠PBL細(xì)胞周期各期細(xì)胞比例無(wú)明顯影響，主要為明顯的誘導(dǎo)凋亡作用。 3、MTX使大鼠PBL